1.5 研究意义

蓝藻暴发不是简单的水体污染问题，而是生态系统的结构、功能在人类活动的干预下发生了重大变化后所呈现的一种负反馈效应，是生态系统失调的表现。随着饮用水和健康问题日益受到重视，对水资源的保护和管理十分重要。人类生产和生活产生的大量氮、磷，随着地表径流、排污系统和大气的干湿沉降过程进入水体中，引起水体的富营养化，导致水体水质恶化，危及人类的身体健康。因此，为了更好的预防和管理藻毒素对人体健康的影响，对水体中微囊藻毒素MC-RR含量的调查，加强对水体水质的监测和管理，以便更为有效地防止生态环境遭到破坏，进行水体水质中藻毒素含量的研究调查是非常有必要的。

目前我国生活饮用水标准GB/T 20466-2006中水中微囊藻毒素的测定方法为固相萃取高效液相色谱法(HPLC)和酶联免疫法，最低检出浓度均为0.1μg/L。HPLC法的灵敏度低，为达到ppt级的检出，样品前处理需要1000mL到1mL的固相萃取-浓缩富集过程，费时且回收率低，此外HPLC专属性不强，同一个保留时间出的峰可能会包含两种以上的成分；酶联免疫法的灵敏度高，水样无需富集，但其他前处理步骤多，操作不方便，且专属性不强，有时会出现假阳性。已发表的液-质联用方法测定微囊藻毒素的文献中，样品前处理都采用固相萃取-浓缩富集法，费时且回收率不理想。超高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法与国家标准方法相比，简便快速，具有更高的选择性、灵敏度和稳定性。

但是由于实验室设备和技术层面的限制，相较于酶联免疫法，HPLC因其分析速度快，方法重现性好而应用较普遍，仍然是实验室常用的一种分析手段。HPLC法准确、灵敏、重现性好，并能同时分析出不同的藻毒素异构体，操作相对简单，仪器设备价格适中，但在鉴定过程中需借助藻毒素标准样品。因此，本实验需要在样品的预处理上做出一种更加简单、快速、准确、环保的测定方法[15]。

由于HPLC方法对微囊藻毒素的检测限为1mg/L左右，而天然水体中的含量一般为μg/L水平，因此水样要通过富集才能进行测定[16]。固相萃取(SPE)是一种集分离、净化和浓缩为一体的样品处理技术，它的高效性和高选择性使其成为微囊藻毒素分析的重要手段。SPE操作简便，有机溶剂消耗少，避免了液相萃取的乳化现象，大大缩短了样品的前处理时间。该方法具有较好的测定准确度、精密度和回收率，且提取率高、藻毒素中杂质含量低，检测限为0.1mg/L，适用于分析水体中的痕量MC-RR。

本实验将采用固相萃取柱SPE对水样进行预处理，通过高效液相色谱HPLC法测定水体中微囊藻毒素MC-RR的含量并绘制出MC-RR标准品的标准曲线。通过手动积分的方法确定水体中MC-RR的色谱图的出峰面积，对比标准曲线的峰面积，从而得出微囊藻毒素MC-RR的含量。另外，本次实验通过对蓝藻细胞的培养，对细胞内外的藻毒素进行提取和纯化，并用高效液相色谱法进行测定藻毒素的含量变化。论文网

2 高效液相色谱仪

本次实验采用岛津Prominence LC-20AT高效液相色谱仪，相比经典液相色谱具有速度快，分辨率高，灵敏度高等优点，并且色谱柱可反复使用，测定样品量少，容易回收。确立了高度对应网络要求的综合管理系统，一元化管理数据与装置，实现了分析的高效率。 

图 2.1 岛津Prominence LC-20AT 高效液相色谱仪

2.1 高效液相色谱仪运行前的准备工作

2.1.1