一般是以含有机溶剂的水相为流动相。流动相由水相（溶剂A）和有机相（溶剂B）混合而成。两种溶剂相互混合时释放出溶解的空气，如果产生的气泡带到泵中，输液泵则不能正常工作。流动相中溶解的气体还可能在LC系统低压端的检测器内产生气泡，引起假峰。因此，流动相或组成流动相的溶剂在使用前需要进行脱气。本次实验所用的流动相主要为配比60%的色谱甲醇和40%的水，pH为3.2的流动相配比（流动相的pH值不能超过色谱柱允许的pH使用范围。pH超出使用范围会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂，使得色谱柱的柱效下降，使用寿命变短），实验所用色谱柱为C18，色谱柱的安装一定要按色谱柱管上标示的流动相流向，将色谱柱的入口端用连接管和进样阀的出口连接起来，色谱柱的出口端则与检测器相连起来。

2.1.2 流动相的脱气、过滤和脱水

有机相通常是HPLC 级的甲醇或乙腈，在有机溶剂中溶解的气体较少，因此可不经过滤和脱气处理直接使用。从超纯水系统得到的水也无需过滤，但是水相含有原来是固体的溶质（如作为pH 缓冲剂的磷酸盐）时，必须过滤处理除去可能存在的颗粒物，滤膜的孔径一般为0.5μm。国内实验室大多采用抽真空过滤，同时完成溶剂的过滤和脱气。

高效液相色谱所使用的流动相在使用前都需要进行脱气处理，目的主要是为了除去其中溶解的气体，比如氧气，来防止洗脱过程中流动相重色谱柱到检测器的流动过程中，有气泡进入。因此，对流动相进行脱气可以使色谱泵的输液均匀准确，减小脉动；提高保留时间和色谱峰面积的重现性；防止进入气泡而引起尖峰；使基线走平，更稳定，提高信噪比；降低溶剂的紫外吸收本底；减少死体积以及防止填料氧化。在比较低的死体积检测池中，存在气泡会导致基线噪声的增加，严重时会造成分析灵敏度下降，而无法进行分析。

2.2 高效液相色谱仪的压力问题

压力是指示液相系统工作是否正常的重要依据,柱压问题是使用高效液相色谱仪过程中需要我们密切注意的地方，柱压的稳定与否会影响色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间。LC系统的压强大小和流动相的组成配比、柱填料的粒径和结构、流速等有关。在梯度洗脱的过程中，由于流动相组成的变化，以梯度运行为周期，压力呈规律性的波动。在等度洗脱的情况下，系统的压力应该保持在适当的大小，压力偏高、偏低或出现周期性的波动都是不正常的，柱压平稳缓慢的变化是允许的。一般压力过高都是由于堵塞所引起的，因此，为了确定堵塞的位置，应该对色谱仪进行逐步排除，从检测器开始，依次拧松连接检测器、色谱柱、柱前过滤器、进样阀、输液泵的接头，确认发生堵塞的组件或管道。

2.2.1 气泡导致的压力问题

泵体中有气泡会使压力偏低且不稳定，如果流动相已脱气处理过，那么气泡有可能来自低压管道一侧松动的接头处，确定完松动位置后，对AB泵进行重新排气处理即可将气泡排出；有时候由于疏忽，会导致储液瓶中的流动相耗尽或流动相低于阀口，使得空气进到输液泵内，系统压力下降，输液泵将停止工作，为了使LC系统恢复到正常状态，必须用流动相将连接管线、泵、色谱柱、检测器中的气体排出。在开始之前，断开输液泵出口处的连接，向储液瓶倒入流动相。打开输液泵的抽液排气阀，提升储液瓶高度，借助虹吸作用和连接在排气阀上的注射器，使输液泵进口管线充满流动相，在较高的流速下使泵运转几分钟后，关闭抽液排气阀，将输液泵与系统连接，在正常流速下冲洗，排除管道、色谱柱和检测器中的气泡。来`自^优尔论*文-网www.youerw.com