摘要外膜蛋白是生物膜上具有特殊结构的蛋白质，是生物膜功能发挥的重要保证，它在物质运输、信号转导以及能量转换等方面发挥着重要的作用。本项目所研究的膜孔蛋白是一种典型的外膜蛋白，普遍存在于原核生物的细胞外膜及真核生物的细胞器外膜。近年来，膜孔蛋白的研究在基因和蛋白水平上均已经取得了显著的进展，其特有的结构特征也给膜蛋白的结构解析提供了研究思路和借鉴作用。本项目主要是以大肠杆菌的膜孔蛋白OmpC为对象，利用分子克隆技术，构建OmpC的表达载体，建立OmpC的表达系统，以期利用该系统表达纯化获得的膜孔蛋白OmpC为膜蛋白的质谱结构与功能的解析提供依据。73233

毕业论文关键词：外膜蛋白  分子克隆  载体构建

毕业设计说明书外文摘要

Title：The expression and Mass Spectrometry of the membrane protein (OmpC) 

Abstract：Membrane protein is a type of protein with unique structure。 It is responsible for the material transportation，signal transduction and energy transformation。 Outer membrane protein is one of the type of the important membrane protein, which is widely present in the cell membrane in prokaryotes and the outer membrane of organelle in eukaryotes。 So far, researches have made some achievements in the membrane protein, while the cognitive of membrane protein is not enough in proteomics。 The study successfully cloned the OmpC gene from Escherichia coli (E。coli) and constructed the expression vector。 The result provided a foundation for the following MS analysis of OmpC。 

Key words: membrane protein; molecular cloning; expression vector 。

目   次

1。 绪论 1

1。1 引言 1

1。2 外膜蛋白的结构及特性 1

1。3 外膜蛋白的研究历程及进展 1

1。4 本课题的主要研究内容 2

2。 材料和方法 4

2。1 材料 4

2。1。1试剂 4

2。1。2 试剂盒及内切酶 4

2。1。3 缓冲液 5

2。1。4 常用仪器及设备 5

2。2 实验方法 6

2。2。1 引物设计 6

2。2。2 提取基因组 6

2。2。3  制作感受态细胞 8

2。2。4 配制LB培养基 8

2。2。5  PCR扩增目的片段 9

2。2。6 PCR产物的回收 9

2。2。7 连入pTG19-T载体（T连） 10

2。2。8 转化接种 11

2。2。9 提取质粒 11

2。2。10 质粒DNA与pET-28的酶切 12

2。2。11 凝胶回收 13

2。2。12 酶连及转化 14

2。2。13 菌落PCR，接种养菌及质粒提取 15

2。2。14 酶切验证及测序 16

3 实验结果 17

3。1 引物设计