摘要膜蛋白一直是结构生物学和药理学研究的热点。传统的膜蛋白质谱解析需要借助去污剂实现膜蛋白的气相转移，但去污剂的存在一定程度上影响膜蛋白的天然构象，其与膜蛋白的竞争性离子化也给后续分析带来困难。多肽类表面活性剂是一种人工设计合成的两亲性试剂，新近的研究表明其在膜蛋白的溶解和稳定上显示出优异的性能。然而，多肽类表面活性剂能否应用于膜蛋白的质谱解析目前尚不可知。因此，我们尝试将多肽表面活性剂应用于大肠杆菌膜蛋白BtuCD复合物的质谱研究中，本设计通过PCR反应将BtuCD两个亚基的基因分别从大肠杆菌基因组中扩增出来，利用分子克隆方法将两个基因分别克隆进表达载体pRSFDuet-1的多克隆位点，实现BtuCD复合物表达载体的构建，继而将构建完整的载体转化到表达菌株BL21（DE3）中，获得BtuCD复合物的表达菌株。膜蛋白BtuCD共表达株系的获得，为其后续的蛋白表达纯化奠定了基础，也为多肽表面活性剂在膜蛋白质谱分析上的应用探索提供了材料。73527

毕业论文关键词  BtuCD  膜蛋白  多肽类表面活性剂  表达载体  质谱分析

毕业设计说明书外文摘要

Title    The Application of Surfactant-like Peptides in The Analysis of Membrane Transport Protein BtuCD

Abstract Membrane protein research has been a hot topic in structural biology and pharmacology。 The mass spectrometry of membrane protein requires detergent to protect membrane protein from solution to vacuum。 However, the detergent affects the natural conformation of membrane proteins to a certain extent, and it also brings difficulties to the subsequent analysis。 Peptide surfactant is an amphipathic reagent which can be designed and synthesized artificially。 Recent research shows that it has excellent performance in the dissolution of membrane proteins。 In this thesis, peptide surfactants are designed to be used in the mass spectrometry of E。 coli membrane transport protein BtuCD complex。 To achieve this goal, two subunit genes of BtuCD were cloned from E。 coli genome and inserted into plasmid pRSFDuet-1 to realize the construction of expression vector of BtuCD complex。 Finally expression vector was transformed into the BL21 (DE3) competent cell。 An attempt was made to confirm the expression of BtuCD complex。 By the construction of coexpression vector, the BtuCD complex can be expressed and purified, providing material for the application of surfactant-like peptides in mass spectrometry of membrane protein research。

Keywords  BtuCD  Membrane protein  Surfactant peptides  Expression vector  Mass spectrometry

目   次

1  绪论 1

1。1  膜蛋白及其研究现状 1

1。2  质谱技术及质谱技术在膜蛋白上的应用 1

1。3  多肽类表面活性剂及其在稳定膜蛋白上的应用 2

1。4  BtuCD蛋白的结构与作用 2

1。4。1  ABC转运蛋白家族 错误！未定义书签。

1。4。2  BtuCD的作用与结构 错误！未定义书签。

1。5  多肽类表面活性剂应用于膜转运蛋白BtuCD质谱分析研究思路 3

2  实验仪器、材料和实验基础操作方法 5

2。1  实验仪器及材料 5

2。1。1  菌种 5

2。1。2  质粒