1。4。1。3主要溶剂配置文献综述

蛋白提取液：10%TCA丙酮溶液（W/V）、0。07%β-巯基乙醇

样品裂解液：7mol/L尿素、2mol/L硫脲、4%CHAPS、65mmol/LDTT

水化上样缓冲液：尿素7M、硫脲2M、CHAPS4%、DTT65mM、Bio-Lyte0。2%（w/v）、溴酚蓝0。001%、MilliQ水

平衡缓冲液：母液6M、SDS2%、Tris-HCl0。375MpH8。8、甘油20%、MilliQ；水平衡缓冲液Ⅰ：母液10ml、DTT0。2g现配现用；平衡缓冲液Ⅱ：母液10ml、碘乙酰胺0。25g、现配现用

12%分离胶：MilliQ水99 mL、10%SDS 75 mL、1。5mol/LTris（pH8。8）75mL、 30%聚丙烯酰胺储液120mL、 10% AP 3mL、 TEMED 0。12mL

10×电极缓冲溶液：Tris 30 g、甘氨酸144 g、 SDS 10 g、 MilliQ 定容至1 L

1。4。2 方法

1。4。2。1鹅观草总蛋白提取

取1g样品，液氮研磨至细粉，加入8mL冰浴的蛋白提取液，-20℃静置过夜，次日20000g，4℃离心30min，弃上清，沉淀中加入8ml冰浴的蛋白提取液，-20℃静置1h，同上离心，重复洗涤沉淀3~4次至蛋白为纯白色，室温放置1h，加入蛋白裂解液4~5mL，-20℃冰箱保存，超声破碎。

1。4。2。2鹅观草蛋白定量

参照 Bradford 法[12]，用TU1901双光束紫外可见分光光度计进行蛋白定量，确保上样量中蛋白含量为300μg~500μg．

1。4。2。3 固相预制胶条的水化来自~优尔、论文|网www.youerw.com +QQ752018766-

取1mL上样缓冲液（不含DTT，Bio-Lyte）加0。01gDTT，Bio-Lyte4-6、5-7各2。5μL，充分混匀，加入样品制成混合液达到300~600μL，使各组上样量保持一致，其余用水化液补足，IPG胶条（17cm，pH4~7）室温放置2分钟，IPG 胶面朝下放入聚焦槽内，覆盖矿物油进行水化。