3。3亚细胞定位 12

3。4AtRPL10C基因克隆 12

3。5PVX／AtRPL10C重组载体构建 13

4。小结 13

参考文献 15

致谢 17

1。背景简介

目前，在植物抗病毒研究中最为清楚的两种抗病毒机制是：RNA沉默介导以及R基因介导的植物对病毒抗性。而最新的研究显示：核糖体大亚基RPL10A（Ribosomal Protein L10A）参与了一套非常独特的抗病毒机制。根据RPL10A的研究基础，为了验证RPL10A的同家族成员RPTL10C是否也有类似的表现，本课题首先从拟南芥中克隆AtRPL10C基因，然后将AtRPL10C亚克隆到PVX载体中，获得PVX/AtRPL10C重组载体。作为病毒诱导基因沉默技术（VIGS）的载体，来研究RPL10C同源基因干涉后的植株表型，为研究RPL10C在植物抗病毒机制中的作用奠定基础。From优Y尔E论W文W网wWw.YouERw.com 加QQ75201,8766

1。1 核糖体

核糖体是细胞内最重要的细胞器之一。在生物体将 DNA 所包含的信息翻译为蛋白质的过程中， RNA 聚合酶Ⅱ以 DNA 为模板合成 mRNA，而核糖体在 mRNA 的指导下，在mRNA上移动，合成相应的蛋白质，这就是转录和翻译的过程。在翻译过程中，核糖体需要解读 mRNA 的密码子，招募相应的氨酰tRNA，并催化肽链的生成。

核糖体无膜结构，主要由蛋白质(40%）和RNA(60%）构成。核糖体按沉降系数分为两类，一类（70S）存在于细菌等原核生物中，另一类（80S）存在于真核细胞的细胞质中。他们有的漂浮在细胞内，有的结集在一起。论文网

核糖体可分为两种类型：真核生物核糖体和原核生物核糖体。原核细胞的核糖体较小，沉降系数为70S，相对分子质量为2。5MDa，由50S和30S两个亚基组成； 而真核细胞的核糖体体积较大，沉降系数为80S，相对分子质量为3。9～4。5MDa，由60S和40S两个亚基组成。RPL10C则是组成核糖体60S大亚基的部分。

1。2抗病毒机制

RPL10A是NIK-1(NSP-interacting kinase-1; NSP: nuclear shuttle protein)的底物，RPL10A被NIK-1磷酸化后，RPL10A将进入细胞核内，调节拟南芥对双生病毒卷心菜曲叶病毒(CaLCuV: Cabbage leaf curl virus )侵染的抗性。而CaLCuV的NSP蛋白，则可以通过与NIK细胞内激酶L-loop结构域结合，而抑制NIK与RPL10A的结果，最终导致RPL10A无法进入细胞核，而使细胞失去对病毒侵入的抵抗性，如图1。所示。

1。3核糖体蛋白RPL10

1。3。1核糖体蛋白RPL10家族

拟南芥核糖体大亚基RPL10亚家族有三个同源基因，分别是AtRPL10A（AT1G14320），AtRPL10B(AT1G26910)以及AtRPL10C(AT1G66580)，三个基因的编码序列长度分别为663bp，666bp和555bp。

1。3。2 RPL10的生物学功能

自闭症有一个大的遗传背景情况，男性的自闭症发病几率高于女性，这种不寻常的男女得病比例说明自闭症的发病机制牵涉到X染色体上的基因遗传以及可能的其他一些原因。Klauck等人（2006）从两个独立的自闭症家庭中发现X染色体上q28段的RPL10基因存在两种错义突变。RPL10蛋白C端末的L206M和H213Q发生了氨基酸替代，然而核糖体的基本翻译功能依然完好。这项发现为解决自闭症提供了新的手术和细胞治疗的方向。

随后， Klauck（2006）等人用小鼠做实验，用RNA原位杂交技术检测出了小鼠海马体（被自闭症高度折磨的大脑边缘系统的一部分）存在高表达的RPL10，基于这些研究结果，提出了一个自闭症的翻译功能障碍的模型来研究这些受大脑边缘系统调控的认知功能障碍的问题。此外，已有实验证明玉米的RPL10A和RPL10B突变体植株表现出不同的表型：敲除RPL10A的突变是致命的，RPL10A杂合子植物UV-B条件下翻译量不足，敲减RPL10B的纯合突变体则生长异常。文献综述