1。1 研究的目的与意义
生物形成认识的重要的信息来源在于视觉[1]。在生物的所有感官能力中,视觉能力可谓重中之重,它关系到生物的观察,辨识,记忆等重要技能的发展,视觉反馈对运动功能执行的准确性有重要作用,而视觉反馈会影响运动功能的输出。通过视觉刺激对视觉输出影响的测试。从行为学上可以研究视觉刺激在运动功能执行中的调节作用[2]。将爪蟾用来作为科学研究的动物,是因为它比其它的模式生物有着更多的优势。首先,爪蟾基因组已经有了完整的数据库;可以用来观察单个神经元的形态变化;爪蟾的卵母细胞可以用来研究蛋白通道的功能;因为非洲爪蟾[4]具有代表性,易于饲养和繁殖,世代周期短,子代多,遗传背景清楚,易于遗传操作,其蝌蚪以及成体均生活在水中,可以很容易的吸收水体中外源性激素或其他化合物等特点。爪蟾已经成为胚胎学、发育生物学、功能基因组学等研究领域的重要模式生物,通过视觉刺激对爪蟾行为学的研究可以反映出视觉刺激对爪蟾视觉神经的影响,从而可以应用于视觉刺激对人视觉发育影响的研究中[4]。论文网
在应用方面,视觉刺激的研究有助于爪蟾视顶盖及神经环路的了解。视觉刺激的不同可使机体视顶盖蛋白的乙酰化水平发生改变,从而造成机体与外界环境失去同步,从而造成对光的敏感程度不同,从而使在不同刺激下的蝌蚪避光率发生改变[5]。鉴于爪蟾作为生物学动物模型的诸多优势,运用爪蟾胚胎进行视觉刺激对其行为及神经环路视顶盖蛋白乙酰化水平影响的研究将具有巨大的潜力[6]。视觉刺激后,检测蝌蚪对光点的逃避反应情况来判定视觉刺激对行为的影响。通过这些检测结果,研究视觉刺激对爪蟾行为学[7]的影响。为今后建立一套检测视觉刺激对脊椎动物影响的科学方法奠定良好基础。
本课题主要的研究内容是探讨4h视觉刺激是否会影响蝌蚪的视觉逃避行为以及这种影响是否是一个长时程的维持。首先选取46期蝌蚪,对其进行4小时1hz的绿光刺激,然后检测蝌蚪的视觉逃避行为,观察视觉刺激后的逃避率是否会改变。分别在24小时和48小时后再次检测视觉逃避行为,分析视觉刺激引起的行为学改变是否是一个持续的过程。在实验过程中,加入组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA,确定视觉刺激引起的行为改变是否与组蛋白乙酰化水平有关。
2 视觉刺激对蝌蚪行为学影响的研究方法
2。1 主要材料
2。1。1主要试剂
10X Steinberg’s Stock:119g Hepes,34g Nacl,2。06g magnesium sulfate,o。8g calcium nitrate,0。5g potassium chloride,1liter water pH7。5,lliter Tsa
绒促性素(HCG):宁波第二激素厂
2。1。2 主要仪器
连续变倍体视显微镜:SMZ1500 Nikon,苏州欧米特光电科技有限公司
爪蟾视觉逃避行为密闭装置(自组装)文献综述
恒温培养箱:福意联,北京福意电器有限公司
暗盒
2。1。3 非洲爪蟾介绍
非洲爪蟾,属于比较原始的蛙类,学名:Xenopus laevis,又名光滑爪蟾,是南非的一种水生青蛙,是一种重要的模式生物。非洲爪蟾后足发达,有五趾,有发达的蹼,其中内侧3趾末端有角质化的爪,故而得名爪蟾;“laevis”意思为“光滑的”,是指其皮肤光滑。加上非洲爪蟾广泛分布于非洲撒哈拉大沙漠以南地区,故而称为非洲爪蟾,俗名光滑爪蟾、非洲滑蟾等。白天多潜藏于水底深处,夜晚则会爬至浅滩。初春至晚夏间是繁殖期。在胚胎学研究中,非洲爪蟾的主要两栖类动物模型。其早期胚胎发育很快,在24度下受精后2天左右就可以孵化成可以自由游动的幼虫。非洲爪蟾是发展生物学的重要模式生物。它们约需1-2年的时间才达至性成熟。且是有四套染色体的。为脊椎动物发育生物学研究,特别是早期胚胎发育研究做出了非常重要的贡献。