2。2实验方法
2。2。1提取绿色丝状细菌总基因组DNA
1) 事先配制PE培养基250mL并在121℃下高压蒸汽灭菌20分钟。接种Chloroflexus aurantiacus菌种至已灭菌后冷却至45°的PE培养基中,并加入一定量的PE培养基将培养瓶填满,接种结束后置于恒温光照培养箱中培养。
2) 约20天后,取2 mL菌液于1。5 mL离心管中,12000转每分离心1分钟,离心结束后弃除上清[10]。
3) 向离心管中加入700 μL CTAB裂解液(65℃预热)。轻轻颠倒混匀之后加入30 μL 蛋白酶K溶液,65℃水浴约1小时。
4) 向离心管中加入700 μL氯仿/酚/异戊醇混合液(24:24:1),轻轻摇晃颠倒混匀。12000转每分离心10分钟。离心结束后将上清液移至另一新的1。5 mL离心管中,并加入10 μL 10 mg/mL 的RNaseA,置于37℃水浴中30分钟。