PCR扩增:10μL的反应体系(如表1),即提取好2μL DNA,2μL SSR引物,再加6μLMix(Mix:ddH2O=5:1)后放入PCR仪扩增(PCR扩增程序(如表2):94℃预变性 5min; 94℃35s,55℃30s,72℃40s(38个循环); 72℃延伸10min)产物放置4℃保存。

试剂                   体积

DNA                   2μL

SSR引物               2μL

 5μLMix                 5μL

ddH2O                  1μL

表1    10μL的扩增反应体系

  步骤           温度        时间           

Step1           94℃        5min

Step2           94℃        35s

Step3           55℃        30s

Step4           72℃        40s(38个循环)

Step5           72℃        延伸10min

表2  PCR扩增程序 

1、2、2 扩增产物电泳及检测

扩增产物在 2% 的聚丙烯酰胺凝胶上进行分离,(称取8g琼脂糖,再加入400mL电泳液(TBE:H2O1:10)中),电压 130 V/cm,经染色(核酸染料)、显影后,拍摄SSR 谱带照片备存和数据分析。

1、3 SSR引物的筛选文献综述

采用SSR标记技术,根据所选的欧洲大麦的样品进行对引物的筛选,获得具有高度多态性的引物。

1、4 数据统计和统计方法

使用Excel软件记录51份大麦品系的SSR谱带照片中的DNA条带大小值。利用28对的引物构建大麦指纹图谱,记录扩增条带,用“1”和“0”分别来表示同一位置扩增片段的有或无。

参考薛华柏等[7]的方法来构建SSR 特征指纹数据表。利用筛选到的SSR引物对欧洲地区大麦品种进行指纹图谱的构建[8-10]。

1、5 数据分析

根据指纹图谱来分析大麦的遗传机制[11-12]。

2、结果与分析

2、1 SSR多态性分析

通过筛选,从多对引物中筛选到28对多态性好的引物(如表3所示),可在实验中得到多个多态性片段

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