植物特有的RAB5同源基因在水稻抗盐中的机理研究(3)
囊泡运输在植物适应胁迫方面具有重要作用。研究显示，小G蛋白ARA6能特异性地调控含VAMP727/SYP121的SNARE复合体的形成，介导从内体到质膜的运输；并且超表达ARA6Q93L使植物具有抗盐特性[12]。这些结果证明RAB5结合不同SNARE复合体，在储藏蛋白靶向液泡的运输或抵抗盐胁迫中发挥功能。植物拥有独特的囊泡运输网络，能够在特定的SNARE复合物和特定的RAB之间建立联系。
拟南芥中含有三个RAB5同源蛋白，RHA1和ARA7属于传统型，与人类RAB5C具有较高的同源性；ARA6则为植物所特有的RAB5蛋白[13-15]。拟南芥中植物特有型的ARA6参与植物抗盐；水稻中含有两个与ARA6同源的植物特有型RAB蛋白（分别命名为RAB5b和RAB5d），在植物耐盐过程中的作用尚没有被完全阐明[16]。虽然人们对水稻抗盐进行了积极的研究，但水稻的抗盐机制还远未被解析，例如囊泡运输和水稻抗盐性之间的关系几乎是一个研究空白。为了给水稻遗传改良提供更好的信息，本文欲对水稻中植物特有型RAB5蛋白（OsRAB5b、OsRAB5d）是否参与耐盐途径，以及植物特有型RAB5介导耐盐途径的可能机制进行探究。
1 材料与方法
1.1 植物材料
野生型拟南芥（Arabidopsis thaliana）为生态型Columbia（Col-0）。
野生型拟南芥由Arabidopsis Resource Center（Ohio State University, Bothell, WA, USA: http://www.arabidopsis.org）提供。
野生型水稻（Oryza sativa L.）为粳稻品种日本晴（Nipponbare）。
1.2 试剂及各种化学药品
抗生素（antibiotics）见表1。
表1 抗生素
名称 来源 溶剂 母液浓度 终浓度
潮霉素（HygromycinB，简写Hyg） Sigma 水 50mg/mL 25μg/mL
卡那霉素（Kanamycin，简写Kana） Roche 水 50mg/mL 50μg/mL
保存：抗生素-20℃条件下保存
试剂盒：质粒小提试剂盒为上海捷瑞生物公司产品；PCR产物回收试剂盒（DP204-03）为Takara公司产品。
本课题中的引物合成服务以及序列测定服务均由司普金公司、生工生物公司提供。