稻瘟病菌细胞壁完整性通路蛋白参与细胞自噬的功能分析(4)
4、PTC8000： PEG8000 40g
补STC 至100ml 121℃灭菌 20min
5、1.2M Kcl： Kcl固体 89.46g
补超纯水至1L 121℃ 灭菌20min
6、TB3 Bottom/Top培养基： Yeast Extract 3g
Acid hydrolyzed casein 3g
Agar Powder Bottom、Top各加10g、15g
补超纯水至1L 121℃ 灭菌20min
7、单层、双层滤布（含漏斗），5层擦镜纸（含漏斗）121℃ 灭菌20min。
2 结果与分析
2.1 稻瘟病菌中的细胞壁完整性（CWI）组分缺失突变体影响细胞自噬过程
实验室前期获得了细胞壁完整性组分缺失的突变体Momck1，Momkk1，Momps1，并发现这三个基因都参与调控稻瘟病菌的致病力，而细胞自噬过程对于稻瘟病菌的致病力具有至关重要的作用，因此我们想进一步的研究稻瘟病菌细胞壁完整性通路是否参与到细胞自噬的过程中。
通过向三个突变体中导入细胞自噬的marker蛋白GFP-MoAtg8载体，并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（western blot）观察该蛋白在野生型（Guy11）和突变体氮饥饿诱导条件下下的降解情况，同时观察该蛋白的定位情况。如图1所示，在氮饥饿诱导5小时的情况下，野生型Guy11菌株中的GFP-MoAtg8已经大部分都被降解，而三个突变体中GFP-MoAtg8的降解则受到抑制，在诱导5小时后依然有大量的未降解的GFP-MoAtg8存在。同时，在N饥饿诱导下观察GFP-MoAtg8的定位情况。在野生型中，GFP-MoAtg8可以正常的定位到液泡中；然而在缺失了细胞壁完整性组分的突变体中，GFP-MoAtg8只能在液泡周围聚集成大块的亮点，而无法正常的进入液泡。以上结果说明，在稻瘟病菌中，细胞壁完整性通路缺失参与到细胞自噬的调控中。