1。1。2 定量PCR技术的原理 6

1。2 番茄果实成熟与发育的研究 6

1。2。1 番茄果实成熟相关的转录因子 6

1。2。2 番茄果实成熟相关的突变体 7

1。3 研究目的与意义 7

2   材料与方法 8

2。1 植物材料 8

2。2 实验试剂 8

2。3 实验仪器 8

2。4 实验方法 8

2。4。1 实验材料收集 8

         2。4。2 植物总RNA的提取 9

2。4。3 cDNA第一链合成 9

2。4。4 实时定量PCR 10

3   实验结果与讨论 11

3。1 野生型AC和突变体Cnr中LeSPL-CNR基因表达模式 12

3。2 讨论 13

4   致谢 14

5   参考文献 15

1。引言

1。1定量PCR技术

    定量PCR技术是就目前来说比较中等程度的目的基因表达水平的一种分析方法，有比较好的灵敏性与专一性，[1]是基因结果分析和验证的常见方式。[2-3]

1。1。1定量PCR技术的由来

    在1993年，日本人Higuchi等第一次使用动态PCR的方法与封闭式监测的方法对目的核苷酸的数量采用定量分析。然后提出了关于实时荧光定量PCR技术的概念。他的初衷非常的简单就是想完整实时的看到PCR整个反应过程。因为当时EB（溴化乙汀）比较广泛的使用，所以他最先想到的就是EB这个标记染料，可以直接插入到双链核酸里受激发光。如此再在普通的仪器上配上激发和监测的装备，首台实时荧光定量PCR仪器就产生了。源Q于W优E尔A论S文R网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201,8766

 1。1。2定量PCR技术的原理

    实时荧光定量PCR技术其实就是实时的检测PCR扩增反应中每一个循环产物的荧光信号，然后对起始模板定量和定性的分析。在定量PCR的反应过程中，加入一种荧光的化学物质，然后随着定量PCR的进行，反应的产物会不断的累积，荧光信号的强度也会按比例增高。如此每一个循环的经过，一个荧光信号就能被收集。如此就可以通过荧光信号的强度的变化我们可以检测产物量的变化，然后得到一条荧光信号扩增的曲线图。

1。2番茄果实成熟与发育的研究

    植物的果实是植物育种下一代的重要器官，同样也是人类饮食结构重要组成的一部分。番茄（Solanum Lycopersicum）因为含有较为丰富的番茄红素和具有比较高的营养价值，受到人们的喜爱，是全球范围内广泛种植的经济作物，因其生长期相对较短、种进化史长、突变体资源丰富等因素，是研究肉质果实发育和成熟的模式作物。[4-6]我国是全球最大番茄生产和进口的国家，番茄为我国产生了十分庞大的经济效益。番茄的贸易总额在2010年超过了56亿美金。[7]处在这样的背景下，如何选育符合市场要求的栽培品种成为了一项有意义的挑战与快速发展的关键。近几年来，中国科学家在对番茄成熟机制的研究也取得了许多重要成果，虽然我国番茄的主要品种大多靠引进国外，但是经过几十年的研究，我国在生物技术方面越来越接近世界的水平。[8-9]