1。2。1番茄果实成熟的相关转录因子 

    转录因子（Transcription Factors)又叫反式作用因子，是一种蛋白质，能与真核基因上游启动子区域发生特异性结合，从而达到激活或抑制基因转录的目的。通过研究表明，植物中存在着大量的转录因子。在番茄生长与发育的过程中预测到998个转录因子，在拟南芥中基因编码了超过1500个转录因子，所以说转录因子在植物生长过程中起着关键作用。在番茄果实成熟与发育中研究比较多的转录因子是LeSPL-CNR、LeMADS-RIN、LeHB1、SIAP2a、SITAGL1等。这些转录因子在果实成熟过程中起着调控的作用。

    利用定点克隆技术和遗传图谱的分析发现LeSPL-CNR属于SBP-box转录因子家族，LeSPL-CNR是一个受表观遗传调控的基因，野生型（AC）与突变体（Cnr)并无核酸序列的差别。[10]在Cnr突变体LeSPL-CNR的启动子上游有一个286-bp DNA区域的胞嘧啶甲基化水平非常的高。而野生型（AC）番茄并没有这种超甲基化现象，在这个区域的这种超甲基化可能抑制了LeSPL-CNR基因的表达，该转录因子突变导致的番茄突变体Cnr的果实不能成熟。由此说明了在番茄果实成熟的过程中LeSPL-CNR的重要性。[11-13]

1。2。2番茄果实成熟的相关突变体

   对于番茄果实成熟的研究认识来源于对番茄成熟突变体的研究。在番茄果实成熟调控的过程中，除了乙烯能影响果实成熟，还有其他的一些不是乙烯调控果实成熟的途径。目前在关于番茄的研究已经发现了一些能够影响果实成熟的突变体。如rin（ripenning-inhibitor）（成熟抑制子突变体）、nor（non-ripening）（不成熟突变体）、Cnr（Colorless non-ripening）（无色不成熟突变体）、hp（high-pigment）（高色素突变体）、Nr（Never-ripe）（永不成熟突变体）、Gr（Green-ripe）(绿熟突变体)等。Cnr（Colorless non-ripening）产生表观遗传的变化是因为LeSPL-CNR蛋白启动子甲基化的变化所导致的。Cnr突变体对外源的乙烯有反应，但是对Cnr突变体果实施加乙烯并不能诱导其成熟。番茄自发体Cnr为自发的突变体，与野生型（AC）的果实相比，Cnr突变体在后代中稳定的遗传，果皮为黄色，果实皱缩但仍有一定的硬度，与其他的番茄突变体表性完全不一样。

1。3研究的目的与意义来自优Y尔L论W文Q网wWw.YouERw.com 加QQ7520~18766

    番茄（Solanum Lycopersicum）含有多种微量营养素如叶酸、维生素、胡萝卜素等，其中番茄果实中含有的番茄红素有助于人们降低患癌和心血管，动脉硬化疾病的风险，深受人们的喜爱。是在全球范围内广泛种植的经济作物，因其生长期相对较短、种进化史长、突变体资源丰富等因素，是研究肉质果实发育和成熟的模式作物。近年来，关于转录因子介导的调控网络在番茄果实成熟中的作用，已经取得突破性的进展，其中LeSPL-CNR便是发挥至关重要作用的转录因子。LeSPL-CNR属于SBP-box转录因子家族，LeSPL-CNR是一个受表观遗传调控的基因，野生型（AC）与突变体（Cnr)并无核酸 序列的差别。因此，利用定量PCR技术探究番茄果实成熟关键转录因子LeSPL-CNR在AC和Cnr不同组织以及果实发育不同时期的表达模式，将有助于进一步阐明LeSPL-CNR的生物学和细胞学特性，从而为揭示表观遗传因子LeSPL-CNR介导的果实成熟受抑制现象提供理论支撑。

2。材料与方法

2。1 植物材料

    番茄野生型AC（Ailsa Craig，AC）和以AC为背景的无色不成熟突变体Cnr（Colorless non-ripening，Cnr）种子为本实验室所有。选取种子籽粒饱满、大小一致的AC和Cnr种子若干，播种于营养土中，于温度25℃、相对湿度60-70%、16h光照/8h黑暗的人工温室中培养。