（5）然后置于95 ℃，孵育 3 min 之后放于冰上，得到的 cDNA 稀释 5 倍可用于后续实验。

2。4。4 实时定量PCR 

    利用北京康为世纪提供的SYBR Green核酸染料开展实时荧光定量PCR，以18S为内参，分析番茄AC和Cnr不同组织和不同发育时期果实内的LeSPL-CNR的基因表达模式。 其中18S和LeSPL-CNR的基因特异性引物参照Chen等（2015a）。[14]每个样品3个生物学重复，3个技术重复。qRT-PCR得到的LeSPL-CNR基因表达的Ct值进行处理并利用student’s-t test进行统计分析。