外源乙烯对黑麦草苗期淹水胁迫的缓释效应(2)
一年生黑麦草(L. multi florum Lam.)是一种丛生型的冷季型草，具有较强的发芽能力和幼苗生长势[5]。黑麦草生长速度快，再生性强，适应土壤范围广[6]。黑麦草具有品质优和产量高等特点，在世界各地被广泛种植。近年来，随着我国畜牧业的高速发展，黑麦草作为牧草的种植面积越来越大，对畜牧业生产的重要性也日益凸显。
乙烯利，学名２-氯乙基膦酸，分子式：C2H6CIO3P，分子量144.49，是一种低毒植物生长调节剂，广泛应用于果实、蔬菜的催熟，也用于花卉中诱导花芽形成和开花[7]。乙烯利施用在作物上, 能很快地被作物各器官吸收，并在茎、叶、花、果等组织内释放出乙烯，调节作物的代谢、生长和发育[8]。乙烯是植物激素，对植物的生长发育的各个阶段起调节作用。现有研究表明各种胁迫都能引起乙烯生产量的增加[9]。
黑麦草幼苗过氧化物酶(POD)活性，随干旱胁迫时间的延长而增加，且随干旱程度的加重，含量也增加。水分不足固然对黑麦草的生长产生不利。抗氧化酶系统如超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶（CAT）作为胁迫时的一些生理生化反应的产物，能在一定程度上反应植物的抗淹水胁迫能力[10]。本研究以黑麦草幼苗为材料，采用喷施不同浓度外源乙烯进行处理，通过测定不同处理时期黑麦草的抗氧化酶系统如超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）活动指标及黑麦草幼苗生长情况，观察喷施不同浓度外源乙烯对黑麦草幼苗淹水胁迫的缓解情况，以期探索出能缓解黑麦草淹水胁迫的适宜外源乙烯浓度或浓度范围。
1 材料与方法
1.1 材料
黑麦草（Annual Ryegrass, 普通四倍体，原产地美国，丹农国际种子公司）
外源乙烯（液体乙烯利，有效成分含量90%，北京索来宝科技有限公司）
1.2 方法
生长指标：测定黑麦草株高和鲜重。
生理生化指标:超氧化物歧化酶（SOD）采用氮蓝四唑(NBT)光化还原法测定[11]。过氧化物酶(POD)采用愈创木酚法[12]。过氧化氢酶(CAT)参照Chance和Maehly方法测定[13]。细胞质膜透性的测定采用相对电导率法[14]。每7天测一次，2016年9月25日播种，2016年10月9日开始测定，2016年11月20日结束。
取Na2HPO4•12H2O71.7g配置成0.2mol/L磷酸氢二钠溶液的A母液，取NaH2PO4•2H2O31.2g配置成0.2mol/L磷酸二氢钠溶液的B母液，分别用蒸馏水定容到1000ml。
分别取A母液228.75ml，B母液21.25ml，用蒸馏水定容到1000ml，加入10gPVP配置成0.05mol/L磷酸缓冲液 PBS。磷酸缓冲液PBS的PH为7.8。
取1.399g Met用磷酸缓冲液PBS（pH7.8）定容到100ml配置成130mmol/L甲硫氨酸溶液。
取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液PBS定容到1000ml配置成100μmol/L EDTA-Na2溶液。
取0.0075g核黄素用蒸馏水定容100ml，并稀释10倍配置成100μM核黄素溶液。
取0.06133g NBT用磷酸缓冲液PBS定容到100ml配置成750μmol/L氮蓝四唑（NBT）溶液。
取50ml 磷酸缓冲液PBS，加入28ul愈创木酚加热搅拌溶解，冷却后加入19μl 30％的H2O2配置成过氧化物酶POD反应液。
取100ml磷酸缓冲液PBS，加入0.1546ml30%的H2O2摇匀配置成过氧化氢酶（CAT）反应液。
所有试剂配置好后均放入低温冰箱中保存。
从对照组和3个实验组分别取3组黑麦草，共12组黑麦草材料，编号。每组大约取3g，放入装有冰袋的保温箱中待用。迅速剪取0.1g黑麦草放入预冷的研钵中，加2ml磷酸缓冲液PBS充分研碎，将研磨好的黑麦草浆液移入2ml的离心管中，放置在冰箱待用。12个组的黑麦草都研磨完毕后，放入事先预冷的离心机中，10000r/min下离心10min，上清液为酶液，待用。