土荆芥微卫星引物开发+文献综述(3)
的距离超过 10 米。取样完成后用硅胶干燥叶片样品进行保存。采样详细情况见
表1。 表 1土荆芥野外采样点位置和生长环境描述
Table1 The details about the location and habits of Chenopodium ambrosioides L.
Province Location Sampling Habitat description
pollution
situation
Latitude Longitude Height（m）
广西
NN 南宁市 公路旁边 无污染 22.820 108.320 95
GP 桂平木圭镇 露天锰矿区 锰污染 23.242 101.821 103
云南
YS 砚山 废弃铅锌矿 铅锌污染 23.548 104.244 1685
JJ 鸡街 多金属冶炼厂 铅锌污染 23.506 103.239 1539
DN 斗南 露天锰矿区 锰污染 23.598 103.690 1711
GJ 个旧 市区路边 铅锌污染 23.362 103.140 1548
MY 建水县 铅锌矿区 铅锌污染 23.996 103.030 1511
XC 新城 新城锰矿区 锰污染 23.809 102.456 1292
KM 昆明 郊区路边 无污染 24.824 102.823 1955
LJ 丽江 郊区路边 无污染 26.865 100.193 2395
YL 彝良县 铅锌矿区 铅锌污染 26.514 103.994 897
湖南
JS 吉首 冶炼厂周围 锰污染 28.298 109.优尔 220
HY 花垣县 冶炼厂周围 锰污染 28.577 109.490 310
XT 湘潭 冶炼厂周围 锰污染 27.960 112.851 57
CS 长沙 荒地四周 无污染 28.201 112.838 42
江苏 YX 宜兴 砺山河旁边 无污染 31.878 118.754 34
四川 HL 会理县 大梁子铅锌矿附近 铅锌污染 26.551 102.162 1802
贵州 JN 望谟郊纳镇 公路旁边 无污染 25.290 106.320 668
1.2土荆芥 DNA的提取
对 18个种群的土荆芥叶片提取DNA。
准备材料：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、β-巯基乙醇、氯仿、异丙醇、乙醇
（1）将100-500 mg硅胶干燥的叶片置于 2 ml 离心管中，加入少量 PVP 和
钢珠
（2）研磨机65 HZ研磨150 s
（3）每个样品中加入 1000 μl Plant DNAzol 和2 μlβ-巯基乙醇，混匀。65 ℃
水浴1 h，每隔5 min 上下颠倒
（4）吸取900 μl 裂解产物到2 ml 离心管，加入 900 μl 氯仿，上下缓慢颠倒
混合均匀。12000 rpm 离心5 min
（5）转移上清液至 1.5 ml 离心管，加入 0.7 体积异丙醇（-20 ℃预冷）混
匀。12000 rpm 离心 10 min，弃上清液
（6）加入800 μl 75%乙醇，吹打数次，弃液体。再加入 500 μl 95%乙醇，
吹打并弃液体，并在室温中直至离心管中乙醇挥发完
（7）加入100-200 μl TE缓冲液或无菌水，4 ℃保存DNA样品
1.3土荆芥 SSR 位点的鉴定与 SSR 引物的设计
使用 Illumina测序平台构建土荆芥基因组 DNA文库。然后为了鉴定以及开发
SSR，所有序列与核苷酸（Nt）收集数据库中的高度相似的序列（megablast）对