· s-1

温度为 25℃,每天定时摇晃 3 次。
1.2.2 铜绿微囊藻的计数及其生长曲线的测定
将指数生长期的藻种加 BG11培养基稀释至初始浓度为 8×105
•mL-1
,按上述条件培
养,每 3 天取样,通过血球计数板计数,绘制生长曲线图。
1.2.3 细菌的培养及细菌无菌滤液的制备
将 B15 接种于液体牛肉膏蛋白胨培养基中,30℃、200 rpm 摇床培养 12 h 后将种子
菌悬液按 1%的比例转接于新鲜的液体培养基中, 再培养 48 h, 获得细菌发酵液。 8000 g,
4℃下离心 10 min去菌体,使用 0.22 µm 无菌滤膜将上清液过滤除菌,获得抑藻细菌无
菌滤液即为无菌滤液。
1.2.4 抑藻菌株对铜绿微囊藻生长的影响
取指数生长期铜绿微囊藻计数后,加入 BG11 培养基稀释成浓度为 1.0×106
•mL-1
的藻液。制备无菌滤液,并按 1%的比例添加到 20 mL 初始浓度为 1.0×106
•mL-1
的藻液
中进行抑藻实验,取等量未作处理的藻液作为对照组,光照培养箱培养 4 天,用流式细
胞仪进行计数,并计算抑藻率。
铜绿微囊藻的抑藻率定义为:抑藻率(%)=(Nc-Nt)/ Nc×100%
Nc 代表对照组 M. aeruginosa 浓度(cells/mL),Nt 代表处理组 M. aeruginosa 浓度
(cells/mL)。
1.2.5 测定不同碳源对 B15 溶藻效果的影响
以蛋白胨(10 g•L-1
)作为氮源,加入5 g•L-1
NaCl 以及 10 g•L-1
不同碳源(蔗糖、
麦芽糖、淀粉、麸皮和酵母提取物)制备 5 种碳源培养基,按上述方法制备无菌滤液。
将各种无菌滤液按体积比 1%的比例加入到 20 mL起始浓度为 1.0×106
•mL-1
藻液中,取
等量未作处理的藻液作为对照组,每组平行 3 个,置于光照培养箱中培养 4 天,每天摇
晃三次。测量并计算抑藻率,通过比较确定出对菌株 B15 溶藻效果最佳的碳源。
将最佳碳源按不同质量浓度(5、10、15、20、25 g•L-1
)测定菌株 B15 溶藻效果的
影响,确定出最佳的质量浓度。
1.2.6 测定不同氮源对菌株 B15 溶藻效果的影响
NaCl 的用量不变,在确定出最佳碳源及其最佳质量浓度的基础上,进一步研究添
加 10 g•L-1
不同氮源(蛋白胨、硫酸铵、硝酸钾、酵母提取物、牛肉膏、尿素、玉米面
和黄豆粉)对菌株溶藻效果的影响。按体积比 1%比例将制备好的 8 种无菌滤液加入到
20 mL起始浓度为 1.0×106
•mL-1
藻液中,取等量未作处理的藻液作为对照组,每组平行
3 个,置于光照培养箱中培养 4 天,每天摇晃三次。测量并计算抑藻率,通过比较确定
出对菌株溶藻效果最佳的氮源。
将最佳氮源按不同质量浓度(5、10、15、20、25 g•L-1
)测定菌株 B15 溶藻效果的
影响,确定出最佳的质量浓度。
1.2.7 培养基优化正交试验
根据上述培养基成分单因子试验结果,选取 NaCl 与上述测定出来的最佳碳源及氮源,将这些元素进行三个水平的正交试验。选出溶藻效果达到最佳的培养基组合。根据
正交试验分析,选取培养基配方和最佳培养基组合进行发酵试验,最终确定最优培养基
组合。
1.2.8 培养条件的单因子试验
采取上述测定的优化培养基配方, 分别研究菌株 B15溶藻效果达到最佳时的培养温
度、培养基初始 pH值、摇床转速、接种量和装液量。
1.2.8.1 培养温度
25℃、28℃、30℃、33℃、35℃、37℃下 200 rpm 培养 48 h,制备无菌滤液,按体
积比 1%比例加入到 20 mL 起始浓度为 1.0×106
上一篇:利用CRISPR/Cas9技术定点突变拟南芥CRWN3基因
下一篇:蜜蜂螺原体黏附相关蛋白对宿主意蜂免疫的影响

绿色丝状细菌绿小体被膜蛋白基因的克隆

1株好氧反硝化细菌CD1的分离鉴定

羟基腈裂解酶在大肠杆菌...

蝉花多糖对枯草芽孢杆菌抑菌机理的初步研究

紫云英根瘤菌的分离与鉴定

绿色光合细菌捕光天线小...

撕裂蜡孔菌多糖的抑菌活...

承德市事业单位档案管理...

10万元能开儿童乐园吗,我...

医院财务风险因素分析及管理措施【2367字】

公寓空调设计任务书

AT89C52单片机的超声波测距...

国内外图像分割技术研究现状

C#学校科研管理系统的设计

中国学术生态细节考察《...

志愿者活动的调查问卷表

神经外科重症监护病房患...