木霉T-soybean几丁质酶功能分析
毕业论文关键词：几丁质酶；木霉T-soybean；酶活性
Analysis of Trichoderma soybean Chitinase Function
Abstract：Chitinase activity of Trichoderma T-soybean was determined by DNS method. Enzyme activity induced by chitin was much higher compared to that of without chitin induction. Chitinase enzyme activity increased with the increasing of chitin concentration in a certain range. However, enzyme activity decreased when chitin concentration was more than 0.9g/mL. Meanwhile, chitinase activity was the highest after culture three days at the chitin concentration of 0.9g/mL, as well as pH=6.0. The inhibitory effects of chitinase on Fusarium oxysporum and Sclerotinia sclerotiorum were determined. It was showed that chitinase had a certain degree of inhibition on F. oxysporum and S. sclerotiorum.
Key Words：Chitinase；Trichoderma-soybean；Enzyme activity
目 录
摘 要 1
引言 1
1. 材料与方法 2
1.1 材料 2
1.1.1 实验用菌 2
1.1.2 培养基 2
1.1.3 实验试剂 2
1.1.4 主要仪器 3
1.2 方法 3
1.2.1 木霉T-soybean的活化 3
1.2.2 诱导木霉T-soybean产生几丁质酶 3
1.2.3 木霉T-soybean几丁质酶活性分析 4
1.2.4木霉T-soybean几丁质酶SDS-PAGE胶分析 5
1.2.5平板对峙实验 6
2. 结果与分析 6
2.1 N-乙酰氨基葡萄糖标准曲线 6
2.2 单因素实验分析 7
2.1.1 不同浓度几丁质对木霉T-soybean几丁质酶活性的影响 7
2.1.2 不同天数木霉T-soybean几丁质酶活性的影响 8
2.1.3 不同pH值对木霉T-soybean几丁质酶活性的影响 8
2.3 SDS-PAGE胶分析 9
2.4 平板对峙 9
3. 结论 10
参考文献 10
致谢 13
木霉T-soybean几丁质酶功能分析
引言
几丁质主要是以β-1,4-糖苷键连接N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖组成的直链状高分子聚合物[1]。它广泛存在于昆虫、真菌细胞壁、特别是节肢动物的甲壳中，如虾、蟹等故俗称甲壳素，又名甲壳质、几丁质[2]。
国际医学营养食品学会将几丁质命名为除糖、蛋白质、脂及、文生素和矿物质五大生命要素后的第优尔大生命要素，因此越来越受到广泛关注，它完全不同于一般天然营养品，现在已知几丁质酶对人体的作用有（1）免疫机能活性化作用，（2）抑制癌症的作用，（3）防止癌细胞转移的作用，（4）除菌作用，（5）改善酸性体质效果，（6）改善糖尿病作用，（7）抑制高血压的效果，（8）镇痛止血效果，（9）增加肠内有益菌作用，（10）强化肝机能作用[3]。在了解几丁质功能的同时对其结构和基因序列也在进行这研究。据2008年以来的报道统计，已知8种木霉的39个几丁质酶基因，而且由这些基因转录的几丁质酶具有催化域、磷酸化域和糖基化域[4]。将已知的几丁质酶基因转入植物中并用几丁质及真菌几丁质细胞壁诱导才能产生几丁质酶，并证明几丁质酶基因的表达是诱导型[5-6]。几丁质酶基因的表达是诱导型这一研究成果对植物生物防治有着重要作用，真菌细胞壁的主要成分是几丁质和葡聚糖。几丁质酶不仅可以降解细胞壁还可以与细胞壁降解酶、杀菌剂、植物病相关蛋白（PR）、其它生防因子相互协同增效[7]。要让几丁质酶的这些功能更好的发挥，可以从几丁质酶的表达量和酶活性着手，本次研究就是研究的在不同的情况下几丁质酶活性。
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