摘 要：将秸秆等废弃纤维素高效廉价的转化为可发酵的单糖是生物燃料工业生产的关键瓶颈。纤维素酶系中，β-葡萄糖苷酶是纤维素彻底降解的关键酶，且又因其含量少、活力低，成为纤维素酶解的瓶颈。研究显示作为工业生产纤维素酶的主要菌株，里氏木霉的β-葡萄糖苷酶在其纤维素酶的整体酶活及其诱导表达中起到了双重关键的作用，而且β-葡萄糖苷酶尤其是其转糖基作用可能催化纤维素酶的诱导分子的合成。β-葡萄糖苷酶是一类非常重要的纤维素酶，广泛的存在于各种生物体内，具有重要应用价值。本实验以里氏木霉Rut C-30为研究对象，通过对里氏木酶β-葡萄糖苷酶cel1a的克隆，为研究分析β-葡萄糖苷酶cel1a在里氏木霉纤维素酶诱导表达过程中的作用作准备。73735

毕业论文关键词：β-葡萄糖苷酶，基因克隆，纤维素酶，里氏木霉

Abstract：The conversion of straw and other waste cellulose to fermentable monosaccharide with high efficiency and low cost is the key bottleneck for biofuel production。 β-glucosidase, the key enzyme in the complete degradation of cellulose in the cellulase system, is the bottleneck of cellulose hydrolysis because of their low expression and activity。 Current research has shown that β-glucosidase from Trichoderma reesei, the main industrial stain for cellulase production, plays a key role in the overall cellulase activity and induced expression of cellulases, and that β-glucosidase, especially its transglycosylation activity, may catalyze the production of cellulase inducers。 The β-glucosidase is a very important cellulase。 It is existed extensively in various living things, and has important application value。 To study and analyze the roles of β-glucosidases in induced expression of cellulase genes in Trichoderma reesei Rut C-30, here we successfully cloned β-glucosidases cel1a from Trichoderma reesei Rut C-30。 

Keywords：β-glucosidase, gene cloning, cellulase, Trichoderma reesei 

目录

1  前言 4

1。1  研究背景 4

1。2  β-葡萄糖苷酶的理化性质 4

2  材料与方法 6

2。1  实验材料 6

2。1。1  菌株与质粒 6

2。1。2  主要试剂及培养基 6

2。2  实验方法 6

2。2。1  目的基因（cel1a）和启动子（Pact）的扩增 7

2。2。2  重叠PCR连接cel1a与Pact（Pact-cel1a） 9

2。2。3  Pact-cel1a与载体（pCAMBIA1300）连接(Pact -cel1a –pCAMBIA 1300） 9

2。2。4  将重组子导入大肠杆菌感受态细胞 11

2。2。5  重组子的鉴定 11

2。2。6  cel1a基因的序列测定 12

3  结果与分析 12

3。1  cel1a的PCR扩增 12

3。2  Pact的PCR扩增 12

3。3  Pact-cel1a的PCR扩增 13

3。4  Pact-cel1a的酶切 13

3。5  质粒DNA片段的酶切 14

3。6  重组子的重组与转化