双酚A对豆科作物幼苗根系活力的影响(2)
大豆是我国四大粮食作物之一，在豆类作物中蛋白质含量居首位，其中含有人体所必需的各种氨基酸，还有文生素A、B、C和D，并富含可食用的油脂，故为重要的蛋白质和油料作物。豆油除供食用外，可制油漆、肥皂、甘油、润滑油，还可制造人造羊毛，又为医药原料。自建国开始，中国一直是世界上最大的大豆生产国和出口国，现在随着国内经济的快速发展和大众膳食结构的逐步蛋白化，我国民众对大豆的需求量显著增加。因此，本实验选取大豆为材料，研究不同浓度的BPA对大豆作物幼苗根系活力及根长，鲜重的影响[4]，研究BPA对农作物的环境毒理学性质，为评价双酚A的环境污染提供理论依据[20]。
1.试验器材
1.1试验材料
本试验选用中黄57、中黄43、庆丰一号三种大豆种子。
1.2主要试剂与仪器
1.2.1药品
双酚A、乙酸乙酯（分析纯）、霍格兰氏营养液、营养土、次硫酸钠（Na2S2O4，分析纯）粉末、蒸馏水、95%乙醇、琥珀酸、硫酸、TTC（氯化三苯基四氮唑）。
1.2.2仪器
电子天平（感量0.001g）、剪刀、纱布、滤纸、直尺、烧杯、玻璃棒、移液管、吸耳球、研钵、托盘、纱布、漏斗、滤纸、容量瓶、光照恒温培养箱、可见分光光度计、pH试纸（5.5-9.0）、刻度试管、试管架、纸杯（直径10cm）、药勺。
2．试验方法
2.1试剂配制
1、配制75%的乙醇溶液，用以试验的大豆种子消毒。
2、分别配制0、10、20、50、75mg/L的双酚A溶液，现用现配。
3、1％TTC溶液：准确称取TTC1.0g，溶于少量水中，定容到100mL。用时稀释至需要的浓度。
4、0.4%TTC溶液：准确称取TTC0.4g，溶于少量水中，定容到100mL。
5、磷酸缓冲液（1/15mol/L，pH7.0）。
6、1mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55mL，边搅拌边加入盛有500mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000mL。
7、0.4mol/L琥珀酸：称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100mL即成。
8、配制霍格兰氏营养液，其配方如下：
表1 霍格兰氏营养液
营养液所需药品 浓度 微量元素液 浓度 铁盐溶液 用量
四水硝酸钙 945ml/L 碘化钾 0.83mg/L Feso47H2O 2.78g
硝酸钾 506mg/L 硼酸 6.2mg/L EDYA-Na 3.73g
硝酸铵 80mg/L 硫酸锰 22.3mg/L 蒸馏水 500mL
磷酸镁 493mg/L 硫酸锌 8.6mg/L pH=5.5
铁盐溶液 2.5ml/L 钼酸钠 0.25mg/L
微量元素液 5ml/L 硫酸铜 0.025mg/L
氯化钴 0.025mg/L
pH=6.0
2.2双酚A处理下的种子
挑选均匀饱满的大豆种子，用75%的乙醇浸泡8s左右进行种子消毒处理，然后用蒸馏水冲洗3遍。采用常规的纸床发芽法来进行大豆种子催芽[2]，托盘内铺两层与托盘底大小相等的滤纸，并在滤纸上铺一层纱布，然后将清洗干净的大豆种子分别置于其上，每盘200粒种子，每个品种两盘，且浇蒸馏水淹没滤纸至种子，将托盘放入光照培养箱，温度设为为25℃，黑暗条件下培养。发芽期间每天用喷壶补充蒸馏水，以保证大豆种子处于湿润状态，进行正常发芽，早晚照看两次，待长出根时取幼苗移栽培养。