茶树叶发育相关的CsGIF1基因克隆与功能鉴定(3)
在本项研究中，基于茶树‘龙井43’转录组克隆并鉴定了CsGIF1基因[18]。对CsGIF1基因的进行了同源序列对比、系统进化、理化性质、亲水性疏水性、蛋白质二级结构等生物信息学分析，并采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）的方法检测了CsGIF1基因在茶树叶片发育过程中（第一叶、第二叶、第三叶、第四叶和老叶）以及响应不同激素处理（1 mM赤霉素、1 mM吲哚乙酸、1 mM水杨酸、1 mM茉莉酸甲酯和0.1 mM脱落酸）的表达水平。本研究旨在揭示茶树叶发育的遗传网络并为茶树对激素刺激的响应提供潜在的分子基础。
1 材料与方法
1．1 材料及处理
供试材料为种植于南京农业大学茶叶科学研究所（中国南京）实验大棚的茶树品种‘龙井43’（C. sinensis cv. ‘Longjing43’）2年生扦插茶树幼苗。生长环境条件为：白天和夜晚的温度分别为25 °C和16 °C，光照时间为16小时，光照强度为300 μmol•m-2•s-1。采用不同发育阶段的第一叶、第二叶、第三叶、第四叶和老叶作为试验材料（图1）。统一选用第三叶为激素处理的材料。处理方法为：1 mM赤霉素（GA3处理），1 mM 3-吲哚乙酸（IAA处理），1 mM水杨酸（SA处理），1 mM茉莉酸甲酯（MeJA处理）或0.1 mM脱落酸（ABA处理）喷洒叶子1次，并统一在2小时后收获。赤霉素、3-吲哚乙酸、水杨酸和茉莉酸甲酯于含2%无水乙醇的蒸馏水中溶解，而脱落酸溶于蒸馏水中。用蒸馏水含2%无水乙醇喷洒的叶子作为赤霉素、生长素、水杨酸和茉莉酸甲酯处理的对照，仅用蒸馏水喷洒的叶子作为脱落酸处理的对照。每种处理制备三个重复。茶树叶片材料收集后迅速浸入液氮中，在–80 °C条件下储存以用于进行RNA提取。
植物总RNA提取试剂盒Quick RNA Isolation Kit为北京华越洋生物科技有限公司产品；大肠杆菌菌株DH5α由南京农业大学园艺学院茶叶科学研究所提供，pMD 18-T载体、Ex Taq DNA聚合酶、反转录试剂盒Prime Script RT with gDNA Eraser以及实时定量SYBR Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)试剂盒等均为大连TaKaRa生物科技有限公司产品。
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