稀土元素镧对淡水涡虫再生中干细胞相关基因的表达影响
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1实验对象
所用涡虫采集自北京市植物园樱桃沟。
1.1.2实验试剂
LaCl3（10mM）母液；动物RNA提取试剂盒（北京天根公司）；RNase-Free ddH2O；β-巯基乙醇；无水乙醇等。
1.1.3实验器材论文网
PCR仪；恒温培养箱；低温高速离心机；振荡器；恒温水浴锅；全自动数码凝胶成像系统；琼脂糖凝胶电泳仪等。
1.2方法
1.2.1涡虫再生实验
设置对照组（蒸馏水培养），并配置0.1 mM、0.5mM、1.0 mM、1.5 mM、2.0 mM五种浓度梯度的LaCl3溶液。取6个培养皿，在清洗擦拭干净后，分别加入20ml处理液，同时每组选取3只健康涡虫虫体，每只以咽为界切成2段放入培养皿中，于恒温培养箱中10℃避光培养。
1.2.2 生长统计
在培养期间，定期用解剖显微镜观察各组涡虫的再生情况，测定并记录ck、0.1 mM、0.5 mM、1.0 mM、1.5mM、2.0mM组的再生速度（以再生出眼点和解体的时间为结点），建立统计表格并分析。
1.2.3 RNA提取
选取对照组及与其差异明显的浓度处理组，再次按原条件培养36小时后，采用天根公司生产的动物RNA提取试剂盒分别提取RNA。提取方法如下：
一、前提准备：
1.制备RNase-Free ddH2O，将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%( v/v)，混匀后放置过夜，高压灭菌。
上一篇：PC-MYB基因的同源性分析