褪黑素对水稻幼苗耐盐性的调控效应及其机理的初步探讨(3)
水稻幼苗定植后，待长势稳定，对其进行不同的试验处理，共4个试验处理，每个处理8箱，具体试验处理如下：
W（营养液培育+清水喷施水稻叶片）
MT（营养液培育+200 μM MT喷施水稻叶片）
SW（含75 mM NaCl营养液培育+清水喷施水稻叶片）
SMT（含75 mM NaCl营养液培育+200 μM MT喷施水稻叶片）
1.3 植株形态外观的观察、株高及其生物量测定
试验于处理15 d对水稻株苗进行观察拍照，并用刻度钢尺测量植株株高。然后将水稻株苗从孔穴中取出，先用自来水冲洗，再用蒸馏水将鲜样洗净，用吸水纸吸干表面水分，分为地上部和根部两部分，在105 ℃杀青15 min后于75 ℃烘干至恒重，称得干重（DW）（孙志国等, 2016）。
1.4 植株N、P、K、Mg和Na含量的测定
植株取样清洗之后分为地上部和地下部两部分，105℃杀青15 min后于75℃烘干至恒重，然后粉碎得到待用的干样品。样品消解处理和上机测定方法参考文献（赵海燕等, 2016）。
1.5 植株叶片相对含水量的测定
将水稻幼苗叶片放入去离子水中，快速冲洗后擦干，，称其鲜重Wf，之后把叶片浸入去离子水中达到饱和的状态，即叶片重量不再增加为止，称叶片饱和鲜重Wt，之后把样品放入烘箱内烘干，称它组织干重Wd（陈建勋等,2002）。
叶片相对含水量=（Wf —Wd）/（Wt —Wd）×100%
Wf — 叶片鲜重（g）；
Wd — 叶片干重（g）；
Wt — 叶片饱和鲜重（g）。
1.6 植株叶片相对电导率的测定
取用大小相同的植物叶片（尽量保证叶片的完整性，少含茎节），利用自来水冲洗干净后再利用去离子水冲洗洗3次，用滤纸吸干表面水分，将叶片剪成适合长度的长条（避开主脉），快速称取鲜样3份，每份0.1 g，分别放到10 ml去离子水的刻度管中盖上玻璃塞放置室温下浸泡12 h，用电导率仪测定浸提液电导（R1），最后沸水加热30 min，冷却至室温后摇匀，再次测定浸提液电导（R2）（陈建勋等,2002）。
相对电导率=R1/R2×100%
1.7 转运系数和离子选择性系数的计算
矿质营养转运系数（Translocation factor, TF）=地上部矿质营养含量/根部矿质营养含量
Na转运系数（Na-TF）=地上部Na含量/根部Na含量
由样品中的K、Na 含量 (mmol g-1 DW)，可计算K/Na 比值，按下列公式（马梅等,2015; Fan等,2011）计算离子选择性比率（SK,Na）：
SK,Na= (地上部K/Na)/(根部K/Na)
1.8 植株叶片抗氧化酶活力的测定
参考李忠光等[19]文献，将5种抗氧化酶在单一系统中进行提取。首先将水稻株苗叶片剪下，迅速置于液氮中。在事先预冷的研钵中用液氮将水稻叶片充分磨碎，迅速转移到零下80 ℃冷冻储藏待用。然后准确称取0.5 g上述处理的水稻叶片鲜样，加入预冷的提取液2 mL和少许石英砂，进行充分研磨，转入到离心管内，再用3 mL提取液清洗研钵，一起转移到离心管内并置于4 ℃下2000×g离心20 min，分离得到上清液进入酶活测定。
超氧化物歧化酶（SOD）的测定方法：按照Giannopolitis和Ries（1977）与李忠光等（2002）研究相结合的方法，反应混合溶液为50 mmol L-1 Tris-HCl缓冲溶液，pH值为7.8，内含0.1 mmol L -1 EDTA，0.1 mmol L-1 NBT，13.37 mmol L-1蛋氨酸。测定的时候，反应混合溶液和0.1 mmol L-1核黄素溶液（用内含0.1 mmol L-1 EDTA， pH为7.8的50 mmol L-1 Tris-HCl缓冲液配制）首先置于25 ℃水浴中预热。取反应混合溶液2.85 mL（对照还原管为2.90 mL，不加入酶溶液），加入到酶溶液50 μL，再加入核黄素溶液100 μL，最终体积为3 mL。将对照管罩上双层锡箔纸进行遮光，与其他试管于25 ℃下4000 lx日光灯下进行光化还原反应40 min，在无灯光照射的室内快速测定A560。酶活性采用抑制NBT光化学反应50%为一个酶活性单位（U）表示。