山羊胎羊组织中miRNA-543的表达差异性研究(2)
徐淮山羊是山羊中的一个品种，主要产地在徐州和淮安一代。其中在睢宁县数量最多；而在淮阴泗洪、泗阳等县也有少量分布。徐淮山羊的羊粪是一种较为优质的有机化肥，对提高土壤的生产性能和农作物的产量有很大的帮助。经过长期的繁殖选育，徐淮山羊具有成熟早、产羔多、耐粗放、板皮质地优良等特点。
RNA(microRNAs，miRNAs)是一类非编码的小分子RNA，大约有22个核苷酸左右RNAs，近年来的研究发现，通过与靶 mRNA的3'UTR 结合而导致 mRNA 的降解或蛋白质翻译的抑制从而下调基因的表达[2] 。已有很多究显示不仅是细胞在表达时具有多样性和时序性，miRNAs 在机体组织器官中的表达也具有和多样性及时序性，对组织器官和细胞的发育、分化过程中均发挥重要作用[3-6]，近十几年来，大概有数百个miRNA在不同物种被鉴定出来[7]，而对于山羊体内miRNA的研究就当前来看主要有林先滋[8]在山羊中筛选出9中可能调控山羊乳腺脂肪酸代谢的miRNA，Ji[9]等对萨能奶山羊泌乳期miRNA进行表达差异性研究发现346种保守miRNA和95种新的RNA，可见miRNA山羊的生长发育中是一个重要的组成部分，并且种类繁多。miRNA-543也是miRNA家族中的一员，从目前的研究来看，薛璟[10]在对牛各个组织中发现miRNA-543在表达上有一定的差异性。关于羊miRNA-543的研究，尤其是山羊暂时没有发现，本次实验研究主要是想从徐淮山羊八个不同部位组织提取总RNA，运用实验手段来发现miRNA在山羊不同组织中的表达量。伴随着研究的推进，miRNA在调节蛋白质表达和细胞合成以及组织发育方面的重要性和普遍性会变得越来越重要和越来越清晰。
miRNA-543 是最近报道的miRNAs家族中的新成员，已有研究发现，miRNA-543 在牛的不同组织部位表达有一定的差异性，通过对秦川牛不同组织以及不同发育时期的肌肉组织的miR-543定量检测发现miR-543很有可能在肌肉生长发育方面发挥一定的调控作用[11] 。其他的重要miRNA调控因子还包括miR-24，miR-24通过负调节其靶基因Sp1可以促进红系分化过程中珠蛋白的表达上调[12]。TGF-β通路也能通过调节miR-206和miR-29来改变HDAC4的表达。其他的例子还包括miR-181，在肌肉分化期间对HOXA11具有调节作用[13]；也有研究发现导致延迟细胞周期miR-221和miR-222有关[14]；EZH2对控制染色质的后天修饰(Juan et al., 2009)具有一定作用，而miR-214对EZH2具有调节作用；miR-378可以促使肌肉分化；miR-125b可以促进肌肉生长。
在相关资料网站上检索发现对羊miRNA-543在羊体内组织的表达差异性并没有相关研究，本次研究主要是想要从徐淮山羊胎羊组织（背肌、腿肌、心、肝 脾、肾、肺、肠）进行实验，利用荧光实时定量PCR来测定在徐淮山羊胎羊各个组织中miRNA-543表达的差异性，为后续的在提高山羊生产性能或者基因改造方面提供实验和理论基础。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1组织来源
样本来源为江苏省邳州市某山羊养殖场，徐淮山羊胎羊分离的组织，包括(背肌、腿肌、心、肝、脾、肾、肺、肠），洗净后迅速放在液氮中，带回实验室在-80℃冰箱中保存。
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