水稻响应纹枯病菌侵染差异蛋白的检测 (2)
1 材料与方法 1．1 试验材料 本次试验所使用的水稻品种有：中抗纹枯病品种 TeQing，高感品种 Lemont。本实验主要在南京农业大学植物保护学院植物与微生物互作分子实验室和植物培养室进行。
1．1．1 水稻材料的获取 选取了对纹枯病的中抗品种 TeQing 和高感品种 Lemont两种水稻品种，在温室种植。
1．1．2 菌株材料的获取 本次试验选取致病能力最强的 AG-1-A 型菌株，分离后在PDA培养基中培养。 1．1．3 其他材料 dNTP（购自全式金）；反转录试剂盒（购自 TAKARA） ；Trizol试剂（购自 TAKARA）等。
1．2 试验方法 1．2．1 丝核菌侵染 TeQing 和 Lemont 两种水稻 取丝核菌培养基，打饼，挑取菌饼侵染TeQing和 Lemont 两种供试菌株，取 0 h和24 h的水稻样品
。 1．2．2 蛋白组学测序 丝核菌侵染后分别取样 0 h、24 h送公司进行蛋白质测序，进行生物信息学分析，挖掘出响应纹枯病菌侵染的蛋白，寻找出与抗纹枯病相关的蛋白。
1． 2． 3 TRIZOL法提取样品的总RNA 取0 h、 24 h、 48 h的水稻茎秆样品， TRIZOL法提取样品的总RNA。 采用Trizol 试剂进行总RNA提取，具体操作步骤如下： 1）取水稻茎秆 0.1 g样品，磨样，经液氮冷冻充分研磨后，加入 1 mL Trizol 试剂，转入2 ml EP 管中，静置 5-10 min。 2）加入 0.2 mL氯仿，涡旋 5 min，室温放置 5-l0 min，4 ℃，12000 rpm离心15 min。 3）吸取约0.6 mL上层水相移至新离心管中，加入 0.4 mL预冷异丙醇，混匀，-70 ℃静置3 h，4 ℃，12000 rpm 离心20 min。