1 材料与方法
1.1  供试材料
本试验材料为506份水稻资源,由杂交稻种质创新实验室提供。
1.2  田间种植和试验方法
2016年5月10日将供试的506份水稻资源播于南京农业大学江浦试验站播种,6月10日移栽。每份资源栽插1个小区,每个小区4行,每行8株。每个小区任选三株分别涂抹GA3作为处理,每株涂抹主茎穗,挂牌做标记,另选三株不处理作对照。株距20cm,行距20cm.常规田间管理
GA3涂抹方法按制种实际进行,在水稻幼穗分化三期或四期进行涂抹,GA3总用量为0. 1mg,涂抹浓度0.1mg/mL, 分三次涂抹,按3:4:3的比例,连续3天上午进行,即当天上午涂抹300ul,第二天上午涂抹400ul,第三天上午涂抹300ul。(洪德林.2014.种子生产学实验技术)GA3处理液由“三优尔牌”75%赤霉酸(上海同瑞生物科技有限公司生产)和蒸馏水配成(配制前用少量的酒精进行溶解),用脱脂棉进行涂抹。每次涂抹GA3处理液时,均匀地涂抹到每株倒二叶上。
1.3  表型鉴定
第三次涂抹以后每隔7d进行一次观察,至植株完成抽穗定型后进行性状调查,调查剑叶角度这个性状。剑叶角度:剑叶叶枕以上茎秆或稻穗(如弯曲需竖直向上拉直)剑叶基部所在直线形成的夹角,精确到1°。
1.4基因组DNA提取、SSR标记基因型鉴定和等位基因鉴定
   基因组DNA提取、PCR扩增体系、采用6%PAGE非变性胶进行电泳;电泳完毕后银染、显影方法参见Bassam等[17] 。
1.5数据分析
1.5.1表型分析
性状对外源GA3的敏感性用2个指标衡量。一个是差值(difference,D),即将由调查性状的外源GA3处理平均值(average of treatment,AT)减去不作处理的对照平均值(average of check,AC)而得到。即D=AT-AC。D反映调查性状经外源GA3处理后的绝对变化,当D为负值时,认为是由实验误差或取样误差造成,将D记为0。另一个指标是敏感指数(index of GA3 sensitivity,IGS),IGS=D/AC×100%,IGS越大,表示对外源GA3的敏感性越高。
在Microsoft Excel 2010软件上,将506份水稻自然群体对GA3敏感反应的表型数据进行处理,分别求出平均数、标准差、最大值、最小值、变异系数、广义遗传率,敏感指数;并在方差分析软件中对数据进行方差分析。广义遗传率用以下公式进行计算:
 其中,σ2g表示遗传方差;σ2e表示误差方差;n表示重复数。此参考盖钧镒的《试验统计方法》中介绍的方法[18]。
1.5.2群体遗传多样性分析
应用统计软件PowerMarker3.25,对542份水稻自然群体资源进行标记位点的遗传多样性分析(Liu和Muse,2005):计算各位点的等位基因数(number of alleles per locus)、基因多样性(gene persity)和多态性信息含量(polymorphism information content, PIC)。
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