绿色素对发酵后秸秆品质影响(2)
1.材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验材料与试剂
玉米干秸秆：取自周口市郊区农村，收获一年，自然风干堆放，无腐烂和霉变，颜色黄白色，切碎为1 ~ 2 cm左右的碎片。
绿色素（食品添加剂级）， 浓硫酸（分析纯），硼酸 （分析纯），盐酸（分析纯），0.1 % 甲基绿 + 0.5 % 溴甲酚绿 （按1 : 1混合），无水乙醇（分析纯），氢氧化钠（分析纯）， 硫酸铜（分析纯） ，蒸馏水。
1.1.2实验仪器
烧杯， 移液管（10 mL），胶头滴管，容量瓶（1000 mL 500 mL 100 mL），量筒（50 mL），玻璃棒， 酸式滴定管，试剂瓶，锥形瓶。
高效液相色谱仪:LC6OOA液相色谱仪 南京科捷分析仪器有限公司。
电子酸度计:雷磁PHS - 3G型pH计 上海仪电科学仪器股份有限公司。
电子天平（感量0.0001） 梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司。
凯式定氮仪：KDT (N) - 04（08）D定氮仪 苏州市天威仪器有限公司。
消化炉：KDT（N) - 04消化炉 苏州市天威仪器有限公司。
电热恒温培养箱：BPH - 9052 上海仪纯实业有限公司。
1.2实验方法
1.2.1实验设计
玉米干秸秆处理：用粉碎机将干秸秆粉碎，大概1 ~ 2 cm的小段，缓慢喷洒自来水，并进行搅拌，直至干玉米秸秆稍微潮湿时，停止加水，将喷洒过自来水后的秸秆每400g再加入绿色素0.3 g，装入试剂瓶中压实并进行密封，然后放置于37 ℃的环境中发酵15天。发酵结束，进行后续的实验指标测定。
1.2.2蛋白质含量的测定
发酵后样品的消化
称取发酵后试样5 g（精确度0.0001），放入消化管中，称取硫酸铜催化剂10 g放入消化管并与试样混合均匀。再加入浓硫酸50 mL后，样品焦化呈黑色，将消化管放入消化炉上，打开抽气三通进水（自来水）使抽气三通处于吸气状态，接通电源，打开各自控制开关，调节电位器使指示电压220 V，开始消化。刚开始消化管内有液体飞溅并有大量的泡沫，待泡沫消失后，直至管内液体呈透明的蓝绿色，继续消化5 h [2]。
消化后，自然冷却，冷却后将样品用蒸馏水定容至500 mL容量瓶内，密封保存。
消化后样品蒸馏
第一步 蒸馏前准备
用橡胶管连接仪器侧面左下方各个相对应接口
（1）NaOH接口连接橡胶管，另一端连接装有40% NaOH的自备容器内
（2）H2O接口连接胶管后，胶管另一端连接装有蒸馏水的自备容器内
（3）冷却水接口连接胶管后，另一端与自来水龙头连接
（4）排水阀和出水口连接胶管，另一端放在下水道
第二步 蒸馏
使用KDT (N) - 04 (08) A,C,D定氮仪进行试样的蒸馏
（1）打开控制面板上的电源开关，仪器开始自动加水
(2)打开面板上的蒸汽开关，仪器开始自动加热。直到蒸馏塑料管有蒸汽喷出并持续喷半分钟左右，关闭蒸汽开关，仪器处于待机状态。
（3）取定容后25 mL的样品放在消化管内，并将消化管放置于蒸馏塑料管下端的弹簧平台上，上端要密封好。
（4）取10 mL 2%的硼酸放与锥形瓶内，并用胶头滴管滴两滴甲基绿+溴甲酚绿混合指示剂2滴。将锥形瓶放置于蒸馏接收管下端的圆形托盘上。蒸馏接收管要在液面以下。
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