女贞子齐墩果酸和熊果酸提取工艺及抗氧化活性(2)
3 结论 11
参考文献 13
致谢 15
女贞子齐墩果酸和熊果酸提取工艺及抗氧化活性 引言
女贞子为木犀科植物大叶女贞的果实，其化学成分目前所了解的主要有三萜类、苯乙醇、醚萜类、黄酮类、多糖类等。近些年女贞子被发现在调节机体免疫功能[1]、抗肿瘤[2]、抗衰老[3]、抗氧化[4]等方面具有明显功效，因此广泛应用于动脉粥样硬化、慢性气管炎、高血脂症、肝炎、糖尿病、更年期综合征等的治疗[5]。自由基是人体中生物化学反应产生的中间产物，体内自由基过多或清除缓慢会导致细胞甚至器官损伤、病变[6]。
本实验以女贞子为主要材料，利用微波辅助提取法，通过单因素试验分析乙醇浓度、微波功率、料液比、微波处理时间对女贞子中齐墩果酸和熊果酸提取率的影响[7]，并通过正交试验优化筛选出女贞子齐墩果酸和熊果酸最佳提取工艺条件。同时采用邻苯三酚自氧化法[8-9]和Fenton法[10-12]测定女贞子不同部位的提取液对超氧阴离子自由基和羟自由基的清除率，研究女贞子的体外抗氧化活性。本实验旨在筛选女贞子中齐墩果酸和熊果酸的最佳提取条件，为女贞子的药用开发利用提供理论依据。
1 实验部分
1.1 实验所用材料、试剂及仪器
材料：女贞子、大叶女贞叶片。
试剂及药品：无水乙醇、磷酸二氢钠、邻二氮菲、冰乙酸、双氧水、高氯酸、磷酸氢二钠、浓盐酸、香草醛、邻苯三酚、齐墩果酸和熊果酸标准品、三羟甲基氨基甲烷、硫酸亚铁。
仪器与设备：AR124CN电子天平（奥豪斯仪器（上海）有限公司制造）；SH2-D(Ⅲ)循环水真空抽气泵（郑州市亚荣仪器有限公司）；恒温鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；FW80万能粉碎机（北京科伟永兴仪器有限公司）；玻璃仪器气流烘干器（巩义市予华仪器有限责任公司）；HH-S4电热恒温水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司）；WD800微波炉（格兰仕微波炉电器有限公司）；723型可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）等。
1.2 提取工艺流程
女贞子→干燥→粉碎→称取女贞子粉2 g→乙醇浸泡2 h→微波提取两次→抽滤→合并提取液→乙醇定容到100 mL→样品液备用。
1.3 齐墩果酸的含量测定
1.3.1齐墩果酸标准溶液的配置
称取干燥至恒重的齐墩果酸标准品2 mg置于10 mL 具塞试管内，再无水乙醇溶解并定容到10 mL，得浓度为0.2 mg/mL的标准液备用。
1.3.2 标准曲线的绘制
按照文献[13]，得到标准曲线方程：y = 32.051x - 0.0052，R²= 0.9976。 图1 齐墩果酸含量测定的标准曲线
1.3.3 齐墩果酸提取率的测定
准确吸取0.5 mL稀释样液，电炉加热挥干乙醇，冷却至常温，然后分别加入5%香草醛—冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸0.8 mL，摇匀，60℃恒温水浴加热15 min后取出,室温冷却，加入5 mL冰醋酸，振荡摇匀、以空白试剂做对照，在波长540 nm处测定其吸光度，根据回归方程算出测量液齐墩果酸的浓度C（mg/mL），按照以下公式计算提取物齐墩果酸的含量（mg/g）。
提取率（mg/g）＝CVN10/W
式中：C－测量液齐墩果酸浓度（mg/mL）；V－粗提液体积（mL）；N－稀释倍数；W－原料干重（g）。
1.4 熊果酸的测定
1.4.1 熊果酸标准溶液的配置
称取熊果酸标准品1 mg置于小试管中，加无水乙醇溶解，转移至10 mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀即浓度为0.1 mg/mL的标准对照液。
1.4.2 标准曲线的绘制
按照文献，绘制标准曲线，得到标准曲线方程：y = 48.626x - 0.0021，R² = 0.9976。
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