落日黄色素对发酵后秸秆品质影响(2)
落日黄色素（分析纯），浓硫酸（分析纯），硼酸分析纯，盐酸（分析纯），0.1%甲基绿+0.5%溴甲酚绿 （1:1混合），无水乙醇（分析纯），氢氧化钠分析出，硫酸铜，蒸馏水。
分析天平（感量0.0001），烧杯，移液管（10mL），胶头滴管，容量瓶（1000mL 100mL），量筒（50mL），玻璃棒，酸式滴定管，试剂瓶，锥形瓶，
凯式定氮仪--------KDT(N)-04（08）A,C,D定氮仪（半自动）
消化炉--------KDT（N)-04消化炉。
1.2实验方法
1.2.1实验设计
玉米干秸秆处理：用粉碎机将干秸秆切碎，大概1-2cm的小段，用自来水浸泡一段时间后过滤，将湿润的秸秆放置在通风阴凉处自然风干12h，将粉干后的秸秆加入落日黄色素0.3g，装入试剂瓶中压实并进行密封，然后放置于保温箱中37摄氏度的环境中发酵15天。发酵结束，进行后续的实验工作。
1.2.2蛋白质含量的测定
发酵后样品的消化
称取发酵后试样5g（精确度0.0001），放入消化管中，称取硫酸铜催化剂10g放入消化管并与试样混合均匀。加入浓硫酸50ml待样品焦化呈黑色，将消化管放入消化炉上，打开抽气三通进水（自来水）使抽气三通处于吸气状态，接通电源，打开各自控制开关，调节电位器使指示电压220V，开始消化。刚开始消化管内有液体飞溅并有大量的泡沫，待泡沫消失后，直至管内液体呈透明的橙黄色，继续消化5h。消化后，自然冷却，冷却后将样品用蒸馏水定容至500ml容量瓶内，密封保存[1]。
蒸馏
第一步 蒸馏前准备
用橡胶管连接仪器侧面左下方各个相对应接口
（1）NaOH接口连接橡胶管，另一端连接装有40%NaOH的自备容器内
（2）H2O接口连接胶管后，胶管另一端连接装有蒸馏水的自备容器内
（3）冷却水接口连接胶管后，另一端与自来水龙头连接
（4）排水阀和出水口连接胶管，另一端放在下水道
第二步 蒸馏
使用KDT(N)-04(08)A,C,D定氮仪进行试样的蒸馏
（1）打开控制面板上的电源开关，仪器开始自动加水。
(2)打开面板上的蒸汽开关，仪器开始自动加热。直到蒸馏塑料管有蒸汽喷出并持续喷半分钟左右，关闭蒸汽开关，仪器处于待机状态。
（3）取定容后25ml的样品放在消化管内，并将消化管放置于蒸馏塑料管下端的弹簧平台上，上端要密封好。
（4）取10ml 2%的硼酸放与锥形瓶内，并用胶头滴管滴两滴甲基绿+溴甲酚绿混合指示剂2滴。将锥形瓶放置于蒸馏接收管下端的圆形托盘上。蒸馏接收管要在液面以下。
（5）打开面板上的水开关，加入20ml的蒸馏水，关闭水开关。
（6）打开面板上的NaOH开关，加入150ml的NaOH溶液，关闭此开关。
（7）打开蒸汽开关开始进行蒸馏。
（8）蒸馏5分钟，使蒸馏接收管处于液面以上，继续蒸馏一分钟，关闭蒸汽开关，结束蒸馏。
（9）取下锥形瓶时，要用蒸馏水将蒸汽就收管冲洗一遍，洗液流进锥形瓶内，锥形瓶内接收液待滴定。
（10）取下消化管时，打开水开关，使废液流出蒸汽塑料管，并用蒸馏水冲洗外侧。之后进行样品的第二次蒸馏，进行多次的数据比对。