复合菌剂对四环素胁迫下小麦幼苗生长的影响(2)
微生物在整个生态系统的物理化学循环中起着关键性和决定性的作用。生态系统中，许多微生物以互生、共生、寄生或拮抗等方式共同存在于自然界中，因此多种不同微生物的共同参与才能完成许多重要的生化过程[4]。复合菌剂指用2种或2种以上微生物菌种制成的微生物制剂，微生物菌种具有功能互补及协同作用[5]。本实验以小麦为材料，研究复合菌剂对水培体系中四环素胁迫下小麦幼苗的缓解效用。通过测定小麦幼苗的株高、根长、湿重、干重，叶绿素含量、净光合速率、过氧化物酶活力、过氧化氢酶活力、丙二醛含量、多酚氧化酶活力等指标，探索复合菌剂缓解四环素污染小麦幼苗的作用机理及复合菌剂对四环素的缓解效用，为复合菌剂的进一步开发与应用提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 试验材料
供试小麦品种为周麦18，由周口师范学院提供。复合菌剂来源于微生物试验室，经活化、培养、稀释成浓度为108 cfu/mL的菌悬液。
盐酸四环素为分析纯试剂，由上海紫一试剂厂生产。
Hogland营养液，其配方如下:
硝酸钾506 mg/L，硝酸铵80 mg/L，四水硝酸钙945 mg/L，硫酸镁493 mg/L，磷酸二氢钾136 mg/L，微量元素液5 mL，pH=6.0，铁盐2.5 mL。
微量元素液：硼酸6.2 mg/L，硫酸锰22.3 mg/L，碘化钾0.83 mg/L，，钼酸钠0.25 mg/L，硫酸铜0.025mg/L，硫酸锌8.6 mg/L氯化钴0.025 mg/L。
铁盐溶液：蒸馏水500 mL，七水硫酸亚铁2.78 g，乙二胺四乙酸二钠3.73 g，pH=5.5。
1.2 培养方法及处理
复合菌单菌菌剂制备方法为：在含有菌种的培养基上，倒入薄薄一层无菌蒸馏水，用灭菌环使菌种混于蒸馏水中，移液枪移入试管中，用分光光度计测菌剂浓度并稀释到108 cfu/mL。
水培装置：将托盘和带孔培养板套在一起，保证培养板和托盘底部有1-2cm的高度，然后将纱布和滤纸折叠双层放在培养板上，添加配置的Hogland于托盘内，直到液面稍微高出纱布，模拟自然水培条件[6]。
培养方法：选用健康、籽粒饱满的小麦种子材料，盐酸四环素为分析纯试剂。用无菌蒸馏水把小麦种子冲洗干净，75%的酒精消毒5秒，无菌蒸馏水冲洗3次，然后用0.1% HgCl2消毒10 min，无菌蒸馏水冲洗5遍，把消毒灭菌后的小麦种子放在24 ℃恒温箱中催芽24 h。在培养皿中平铺两层滤纸和两层纱布，加入20 mL灭菌蒸馏水，均匀播入大小均匀一致的浸泡过的小麦种子（20 粒•皿-1），25℃、约2100 lx光照培养，定期补充适量的无菌蒸馏水。培养8 d后，选取大小基本一致的小麦幼苗移植到水培装置上，按时补充适量的营养液。分别用不同处理液处理，处理分为A、B两组。A组处理为 108 cfu/ml复合菌剂+四环素（0mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg、60mg/kg、80mg/kg、100mg/kg），B组处理为加入四环素（0mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg、60mg/kg、80mg/kg、100mg/kg），每个处理重复三次，将种子放于30 ℃培养箱中萌发。每天浇灌250mL处理液以确保种子湿润。培养8 d后取出进行生理指标的测量。
1.3 测定项目和方法
种子培养到8 d时，随机取部分小麦新全展叶的中间小叶，用蒸馏水反复冲洗后剪碎研磨，进行生理生化指标的测量。
叶绿素含量的测定采用丙酮—乙醇提取法来测定[7]；丙二醛含量的测定采用硫代巴比妥酸（TBA）显色法[8]；过氧化物酶活力的测定采用愈创木酚比色法测定[9]；过氧化氢酶活力的测定采用紫外分光光度法；多酚氧化酶活力的测定采用邻苯二酚比色法[10]。
1.4 数据分析
试验数据都是取三次测量结果的平均值，用Excel 2003和SPSS 17.0等软件进行数据差异性分析。