拟南芥NaKR2超表达转基因株系的构建(4)
由于该NaKR1基因表达特定于同伴细胞，我们的研究结果表明nakr1 GFP融合蛋白是通过PD移动到筛管的并被卸载到根分生组织的一些细胞中。作为对照，对同龄幼苗转化SUC2pro:GFP的GFP荧光进行分析。SUC2在伴侣细胞中特异表达，在韧皮部发现GFP荧光在成熟的根区内的次生细胞层内正如此前报道。游离GFP通过共质体扩散到整个根分生组织 。与游离GFP(27 kD)相比, NaKR1-GFP (61 kD) 在成熟根中的韧皮部更受限制。这与Stadler et al.2005. 可溶性GFP融合36到67 kD的分析结果相似。与游离GFP相比NaKR1-GFP在根端移动更受限制。
为了测试NaKR1蛋白的流动性是其功能的本质，用NaKR1pro:NaKR1-GUS转化nakr1-1. 与NaKR1-GFP (61 kD)相比NaKR1-GUS (102 kD)大小较大，有望通过PD使NaKR1-GUS移动。24例初级转化中，20例表现了根缺陷和晚开花表型完全互补。突变体的高Na+, K+, and Rb+表型也被互补。在补充线中GUS的染色模式与与Col-0背景植物中的表达模式类似。这表明，在根分生组织中NaKR1的韧皮部后运输对根系生长中的NaKR1可能不是必须的功能。
在此基础上，NaKR1在韧皮部区域中特异表达。基于透射电子显微镜的结果，nakr1-1亚细胞结构与Col-0成熟韧皮部相比无差异，韧皮部特异基因ALTERED PHLOEM DEVELOPMENT (APL) 是保持韧皮部细胞的特性必不可少的。APLpro:GFP-APL的表达用于研究韧皮部细胞的身份，作为融合蛋白特异性标记的伴侣细胞与开发原生韧皮部/韧皮部细胞。GFP-APL在Col-0和nakr1-1植株中的表达无差异，说明在nakr1-1突变体中韧皮部分化过程正常进行。