3.3 小鼠总DNA提取 9

3.4 引物设计 9

3.5 小鼠总DNA的PCR扩增 10

3.6 琼脂糖TAE凝胶电泳分离PCR产物 11

4. 实验结果 12

4.1 温度梯度 12

4.2 PCR鉴定结果 13

4.2.1 以Cre为引物 13

4.2.2 以Sox2Cre为引物 14

4.2.3 以GFP为引物 18

1. 引言

1.1 视网膜组成及其信号传递

哺乳动物的视网膜由至少60种神经元组成,虽然种类繁多,但可分类成6类神经细胞和1类胶质细胞。这7类细胞排列组成视网膜:视网膜的最外层——外核层,由视锥细胞和视杆细胞两种感光细胞组成;内核层由双极细胞、水平细胞、无长突细胞以及Müller细胞组成;神经节细胞层中是视神经节细胞(RGCs)[1]。

两种感光细胞都可将光信号转化为电信号。视杆细胞是视神经细胞中数量最多的神经元。即便是非常弱的光线,视杆细胞也能感受到,因而全都用于夜视力,但是视杆细胞不能分辨颜色。视锥细胞用于感受较强的光照。灵长类哺乳动物的视锥细胞分为三类,分别用于感受长、中、短三种不同波长的光[2]。

水平细胞树突与感光细胞相连。当感光细胞被激活时,水平细胞通过突触连接,抑制周围的感光细胞[3,4]。水平细胞会综合几个视锥细胞的光信号,增强视觉刺激的边界效应,增加刺激位点和邻近位置的对比度[1]。

双极细胞扮演了承上启下的作用,接收感光细胞的电信号,并把信号传给无长突细胞和视神经节细胞的中间神经元。

无长突细胞是一种抑制性中间神经元。它通过反馈双极细胞和正反馈抑制视神经节,辅助早期视觉的呈现。一般情况下,无长突细胞从同一条树突延伸分叉形成突触输出到接收输入的地方,这个过程不贯穿胞体[5]。

RGCs是将视网膜信号传递给大脑的神经元。在内丛状层(IPL)中,RGCs与双极细胞和无长突细胞形成突触,或接收兴奋性突触输入,或抑制性突触输入[6]。RGCs的轴突沿着视神经投射到大脑中的视觉接受区域,之后传递给更高级的中枢[7]。

  1.2 Sox2简介

SOX家族是一类SRY(sex determination region of Y chomosome)相关基因构成的基因家族,编码一系列SOX(SRY-related HMG-box)家族的转录因子,参与胚胎发育和细胞命运决定的调控,所有成员的共同特点是均含有一个与SRY相关的HMG box同源的高度保守的HMG-box DNA结合域[8] 。其家族中有一种基因——Sox2参与胚胎发育和细胞命运决定的调控,它的基因突变将会导致双侧无眼畸形。

1.2.1 Sox2 蛋白及cDNA 序列的特点

1996 年,Collignon等人得到Sox2 的全长cDNA,全长2 418bp,它编码319 个氨基酸,分子量约为35kD 的蛋白。Sox2蛋白的N 末端第40~65个氨基酸富含疏水氨基酸,接下来是79 个氨基酸的HMG-box,紧挨HMG-box 的是一段B 组的同源序列,然后是199 个氨基酸的C末端。Sox2 的HMG-box 以高度亲和力结合特异的DNA 靶序列‘5 -(A/T)(A/T)CAA(A/T)G -3’[9],Sox2 对靶序列的结合力KD=1.5×10-8M。

上一篇:桂花幼胚培养和桂花子叶切块诱导愈伤的研究
下一篇:高中生物微课教学现状的调查与建议

Six3Cre转基因小鼠的基因型鉴定

小鼠皮层PV+神经元fgfr2敲除对突触蛋白的影响

Sox2CreER转基因小鼠的基因型鉴定

Lhx4条件性敲除小鼠的基因分析

矮牵牛转基因毛状根的诱...

撕裂蜡孔菌多糖的抑菌活...

纳米氧化TiO2诱导小鼠心肌...

承德市事业单位档案管理...

国内外图像分割技术研究现状

志愿者活动的调查问卷表

医院财务风险因素分析及管理措施【2367字】

10万元能开儿童乐园吗,我...

中国学术生态细节考察《...

神经外科重症监护病房患...

AT89C52单片机的超声波测距...

公寓空调设计任务书

C#学校科研管理系统的设计