1992年，中国首先在大田种植转基因抗病毒烟草，揭开了全球转基因作物商业化的序幕；1994年，美国农业部批准转基因油菜进入市场，转基因油菜的种植面积快速增长。最新报道表明，2004年转基因甘蓝型油菜(Canola)达到23.0×106hm2（占世界油菜种植面积的19%），比2003年的种植面积增加了16%。对除草剂的耐性一直是商业化转基因油菜最主要的特性，其次是抗虫性[4]。与其它自花授粉农作物不同，油菜属十字花科芸苔属油料作物，是一种（常）异花授粉作物，其天然异交率可达30%左右，油菜也易与别的芸苔属作物杂交；且油菜在收获时大约有1%～10%的种子会落在泥土里。这些种子由于诱导了次生休眠[5]，可以在土壤中存活数年至10年，我们称之为自生油菜。由于自生油菜在空间上可通过花粉、在时间上可通过土壤存活（即出苗时间长）等传播，与野生芸苔属植物间潜在杂交危险[6]；据报道，加拿大的田间已出现了能够抗3种除草剂的自生油菜，因此转基因作物的生态风险已引起各国科学家的高度重视[7.8.9]。

此外，为了满足愈趋紧张的能源需求，实现人与自然和谐发展，清洁的新型能源——生物柴油[10.11]倍受关注，而作为其主要原料之一的油菜正越来越受到关注与重视[12.13]。因此，油菜相关研究对人民生活水平提高、膳食结构改善及调整种植结构、保障粮食、能源和环境安全都有重要意义。论文网

1.2  DNA常用的提取方法

自20世纪50年代Watson和Crick提出DNA双螺旋模型以来,分子生物学在广度和深度上都获得空前的发展。DNA作为分子生物学研究的基础，在生物领域尤其是遗传学方面的研究日渐深入，在此基础上产生的基因工程技术已在医药、农业、畜牧业等领域获得广泛应用。研究和应用DNA的基础是提取纯化结构完整的DNA，为此针对不同来源的DNA建立了不同的提取纯化方法。

本文采用的四种方法分别为传统的CTAB法、高盐低PH法和两种改良SDS法。这四种方法在所用试剂和操作过程上大不相同，因此有较明显的可比性。在所用试剂中，十二烷基磺酸钠（SDS）是一种阴离子强表面活性剂，通常与蛋白酶K和抗氧化剂、螯合剂一起使用，与蛋白质和多糖结合成复合物，释放出核酸；而表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）在高盐下能与核酸结合形成复合物。此复合物在高盐（>0.7mol/L）浓度下可溶，并稳定存在，但在低盐浓度（0.1～0.5mol/L NaCl）下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来；乙二胺四乙酸（EDTA）可用于抑制金属离子依赖性的酶（螯合Mg2+、Ca2+）的活性，降低DNA酶活性，减少对DNA的降解。NaCl提供一个高盐环境，使DNP充分溶解于液相中；β-巯基乙醇可用于保护DNA免受醌类物质、二硫化物、多酚氧化酶等物质的损害。

1.3  目的与意义

油菜是我国最主要的油料作物，各个农业科研机构对油菜的研究日益重视，其中提取高质量、高纯度、大批量的油菜DNA是分子生物学研究的基础，是种子检验过程中纯度鉴定、蛋白质电泳检测的关键，因此也是实验进程中直接关系到成败与否，具有决定意义的一步。虽然目前植物DNA的提取及纯化方法比较成熟，但不同的DNA提取方法对某一具体植物而言，提取效率却相差很大。因此，确定出油菜的最适核酸提取法，对我们即将进行的下一步实验能否顺利展开以及能否顺利得出较为准确的结果有着重要意义。本文通过用CTAB法，SDSⅠ法（加乙酸钾），SDSⅡ法（加氯仿/异戊醇）和高盐法四种方法提取油菜叶片DNA。通过琼脂糖凝胶电泳、分光光度计检测等方法检测所提取的DNA以比较四种DNA提取方法的优劣。并推荐一种较好的方法，为下一步实验奠定基础。