1 实验材料与方法

1.1实验材料

紫薯、大豆、小麦、大米均购买于江苏徐州师范大学泉山校区东门对面文沃市场。

蛹虫草菌（江苏省药用植物生物技术重点实验室保藏，菌号KLBMP0021）

1.2实验药品与试剂

蒸馏水、甲醇、丙酮、乙醇

1.3实验仪器

恒温干燥箱、超净台、高温灭菌锅、培养箱、旋转蒸发仪、恒温水浴锅、回流提取装置、LC-MS液质联用仪

1.4实验方法

1.4.1紫薯的预处理

从市场上买入常见的紫薯1.25kg，将其冲洗干净，集体切成小粒状，然后放入45℃的恒温干燥箱中，经过5h30min取出，称量其重量为414.6g。

1.4.2培养基的制作和取量文献综述

  经多次实验，适当取量，使得培养基按比例取得之后占培养瓶的体积的三分之一。本实验一共制作12个培养基，分成两批操作。第一批如下，分别取大米30g、黄豆10g、小麦10g、紫薯0g记为1号，取大米0g、黄豆10g、小麦10g、紫薯30g记为2号，取四份量为大米10g、黄豆10g、小麦10g，紫薯20g记为3号、4号、5号、6号。第二批如下，分别取大米30g、黄豆10g、小麦10g、紫薯0g记为21号，取大米0g、黄豆10g、小麦10g、紫薯30g记为22号，取四份量为大米10g、黄豆10g、小麦10g，紫薯20g记为23号、24号、25号、26号。

1.4.3培养基的灭菌处理

将第一批培养基放入120℃高温灭菌锅中15min后降温。将第二批培养基放入120℃高温灭菌锅中30min后降温。

1.4.4培养基的接种与培养

待所有培养基降到室温后放入超净台，进行15min紫外线照射，点上酒精灯，将接种环烘烧至火红色，在火焰的周围，搅匀配制好的蛹虫草菌液并将其平均倒入到每一个培养基中，最后将培养基放入22℃温度、90%rh、0%光照度的培养箱中进行培养[10]。

1.4.5培养基的烘干

观察并记录培养基的变化。一个月之后，将培养基取出并进行烘干和重新编号。恒温干燥箱的设定值为47，重新编号如下：1号变为第一次对照1、2号变为第一次对照2、3号4号5号6号统一变为第一次实验组、21号变为第二次对照1、22号变为第二次对照2、23号24号25号26号统一变为第二次实验组。

1.4.6培养基的提取浓缩

将分别对各培养基中色素进行提取，实用甲醇和丙酮，比列为1:2，一次实用150ml试剂且培养基完全浸没在试剂中，使用回流提取装置220℃加热，沸腾后用100℃恒温加热1个小时。最后使用旋转蒸发仪，进行溶液的浓缩萃取，编号不变。

1.4.7 LC-MS分析及测试条件

 HPLC条件：采用 Halo (100× 2.1 mm，1.7 μm) 色谱柱；柱温箱温度为45 ℃，流速为0.4 mL·min−1，进样量为5 μL；流动相A: 0.1%甲酸水溶液；流动相B：乙腈，梯度洗脱，条件如下[11]：

时间 流速mL/min A% B%

0 1 99 1

1.5 1 97 3

13.5 1 68 32

18.5 1 40 60

20.5 1 1 99

22.0 1 99