(4) PCR结束后，将扩增产物点到点样孔中进行0.8%琼脂糖凝胶电泳。电泳结束后，把胶放入到EB溶液中染色10min。染色好的胶放入凝胶成像仪，观察是否扩增出目的片段（约1500 bp），然后送至上海生工生物工程股份有限公司进行测序。

2.6.2 16S rRNA基因系统系统发育分析

  根据测序结果，从GeneBank数据库中调出相似性较高的相关菌株的16S rRNA基因序列，然后用Clustal X[22]进行多序列比对，用Mega 5软件采用邻接法[23]进行系统进化树的构建和相似性分析。

2.6.3 DNA G + C mol% 含量测定

  采用焦凯琳[24]的方法进行HPLC。

  根据样品色谱图中脱氧核糖核苷酸的峰面积计算的G+C含量[25]。  （G+C)mol%含量计算公式：

（G+C)mol%= ×100%

2.6.4 DNA-DNA分子杂交

  采用荧光标记微孔板法进行[26]。 

3结果与分析

3.1形态和培养特征

菌株KLBMP 5180在查氏、NA、TSA、ISP 5、PDA、ISP 2、ISP 4培养基上生长较好，菌落颜色为浅黄色，在ISP 3培养基上中等生长，在ISP 5培养基生长较差（表3-1）。将菌株接种到ISP 2培养基上，培养7天后，通过扫描电镜观察菌株的形态，图（3-1中扫描电镜照片）显示细胞呈单个近球状，呈不规则的堆状，无菌丝形成。

表3-1 菌株KLBMP 5180的培养特征   来,自|优;尔`论^文/网www.youerw.com   

查氏 NA ISP 3 TSA ISP 5 PDA ISP 2 ISP 4

KLBMP 5180 生长：good

菌落颜色：黄色 生长：good

菌落颜色：浅黄 生长：moderate

菌落颜色：浅黄 生长：good

菌落颜色：白色 生长：poor

菌落颜色：白色 生长：good

菌落颜色：浅黄 生长：good

菌落颜色：浅黄 生长：good

菌落颜色：浅黄

图3-1 菌株KLBMP 5180在ISP 2培养基上培养7天的扫描电镜照片

3.2生理生化结果

  菌株KLBMP 5180是革兰氏阳性菌，（表3-2）表明菌株KLBMP 5180温度生长范围4-37oC，可在pH4-10范围内生长，可耐受0-7%NaCl浓度。能够水解Tween80、Tween40和Tween20，脲酶实验、淀粉酶水解实验阳性，过氧化氢酶阳性，牛奶冻化实验、明胶液化实验均呈阳性；H2S产生实验，纤维素酶水解实验均呈阴性；能利用D-核糖、L-阿拉伯糖、甘露糖、棉子糖、鼠李糖、木糖、纤维二糖、半乳糖、D-果糖、麦芽糖、葡萄糖、糊精、肌醇、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甘氨酸、精氨酸、丝氨酸、组氨酸、赖氨酸作为唯一碳源、氮源生长；微弱或不能利用丙氨酸、甘氨酸、纤维素、乳糖、D-山梨醇、海藻糖、赤藓醇、木糖醇、半胱氨酸、DL-酪氨酸、L-天冬氨酸、谷氨酸；KLBMP 5180与相近物种在碳源、氮源的利用上存在差异。