1.2鲫鱼的血液成份及研究现状

鱼类的血细胞包括红细胞和白细胞, 白细胞又有淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和血栓细胞。也有人认为, 并不是所有的鱼类都有嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞, 它们的有无随鱼种而异。与哺乳动物血细胞组成相比, 鱼类血细胞组成的最大特点, 在于它不含有与哺乳动物一样的血小板, 而是含有功能类似于血小板的血栓细胞。虽然血栓细胞与血小板一样可参与凝血过程, 但二者的形态和来源却迥然不同: 血小板无核, 系由骨髓的巨核细胞分离出来的细胞质小块; 而血栓细胞是具细胞核的细胞, 有卵圆形、梭形、杆状等多种形态, 它的来源目前还没有定论, 在鱼类的造血器官中, 也还没有找到其发育的证据[4]。

2材料与方法

2.1实验动物与试剂器材

实验动物：自农贸市场购入体长约为20cm的鲫鱼5尾。由于实验动物数量较少，故本文不讨论实验动物年龄、性别、体重等方面因素对血液理化性质造成的影响。

实验试剂： 红细胞稀释液（NaCl 0.5g，Na2SO4 2.5g,HgCl 20.25g，蒸馏水定容至100ml）；白细胞稀释液（冰醋酸2.0ml,1%龙胆紫1ml，蒸馏水定容至100ml）；血小板稀释液（尿素10g，柠檬酸钠0.5g，40%甲醛溶液0.1g，蒸馏水定容至100ml）；0.1ml/L盐酸；1%NaCl溶液；0.9% NaCl溶液；0.1mol/L NaOH溶液；乙醚；3.8%柠檬酸钠溶液；75%酒精；生理盐水。

实验器材：手术剪，血细胞计数板，一次性定量毛细取血管（10μl），移液管（1ml、2ml、5ml），滴管，小试管，显微镜，蒸馏水，医用注射器（1ml)，离心机，1.5ml离心管，洗耳球，玻璃棒，血红蛋白计，秒表，载玻片，盖玻片，50ml烧杯。

2.2实验方法

2.2.1鲫鱼血液的采集

关于鲫鱼血液的采集方法主要有三种，但这三种取血方式都各有优缺点。

本实验采用心脏取血法与断尾取血法相结合。鲫鱼断尾取血与心脏取血步骤大致如下：

断尾取血：从饲养池中取出活的鲫鱼，用干燥纸巾将鲫鱼体表水分擦拭干净，以防污水混进所采取的血液造成实验结果误差，再用手术剪剪断鲫鱼尾柄，可见有鲫鱼尾部静脉血溢出，擦除表层血，等血液再次溢出时，用毛细玻璃管吸取，直至血液充满管腔为止。断尾取血过程此时方为完成。

心脏取血：用手术剪剪开鲫鱼腹腔肌肉，注意剪刀尖向上方挑着剪以免扎破心脏。从围心腔找到心脏，在心脏的下方有一类似三角形的膜状区域，称为静脉窦，然后右手拿医用静脉注射器针头从中间向左下扎针，缓慢抽取，过于大力容易导致静脉窦吸附在针头上不便于血液抽取。鲫鱼心脏左下和右下方都有回流血管，比较容易抽取血液。依据实验所需血液体积抽取相关数量，此时，心脏取血过程方为完成。文献综述

改进了的取血方法,是在鲫鱼上体形成活体组织槽取血。可在较小的卿体上采得较多的血量。方法是将活鱼固定于自制木槽中，腹面向上，拭净头部腹面，小解剖剪将头腹面中央从鳃盖游离部分开始处到鳃盖后缘的皮剪开,再将基舌骨连同附着在基舌骨上的一小部分肌肉一同剪去,然后,用钝头小镊顺着清出一沟,仔细清除此沟四壁上的结缔组织,到沟底出现腹大动脉为止。此时,沟扩展成为一个活体组织槽,槽底为腹大动脉,槽两侧壁是与最内侧鳃叶相连的结缔组织薄膜。轻轻将槽拭净,便可采血，用18号针头从槽的远心端刺穿腹大动脉管壁,倾刻,即在组织槽内注满一槽血液,此时,即可及时采血,采血时间不宜过长,以防血液凝固,如一次穿刺的血量不够,可用脱脂棉再细心拭净组织槽,从第一次穿刺处的近心端再穿刺一下,又可获得一槽血液,如此重复可穿刺5-6次，每次血量1-3 毫升（视鱼体大小而不同）。采出之血,全无半点污染,比从鳃血管采血和其他采血法都较为优越。另外,采血时应注意：（1）组织槽在每次拭净时不能弄破。（2）穿刺腹大动脉必须从远心端开始逐次向近心端移动,不能先从近心端开始,因为,穿刺处血液凝固,会阻塞腹大动脉,第二次穿刺便采不到血。技术熟练时,只需要用1分钟左右的时间便可完成组织槽的制作[5]。