渗透调节是植物适应盐胁迫的主要生理机制之一,是植物对盐胁迫逆境下的一种适应性的反应[17],也是植物耐盐最常见的方式。在盐胁迫情况下,细胞外的水势低于细胞内的水势,高水势流向低水势,细胞内离子浓度高,细胞外离子浓度低,使细胞内部水分向外流失,使水分散发[18]。正常的生理代谢活动时细胞外的离子浓度是低于细胞内离子浓度,细胞从细胞外环境获取水分。为了使细胞回复正常代谢活动,细胞自身出现渗透调节方式。即降低细胞内的水势,使水分的跨膜运输朝着有利于细胞生长的方向流动 [19]。渗透调节方式使植物在盐胁迫逆境条件下,积累一些渗透调节物质以此来回复到正常的代谢活动中[20-21]。作为渗透调节的物质主要是为了保持渗透平衡和防止水分散发,这些物质主要是无机离子、脯氨酸、甜菜碱、糖类等。所以我们可以通过对渗透调节水平的检测来评判植物耐盐能力。
因此,我们用来评价植物耐盐胁迫能力的方式就是检测出植物抵抗离子胁迫水平(排除Na+,积累K+)、抗过氧化物酶活性水平(POD、APX、SOD等清除过氧化物活性)以及渗透调节水平等,来判断我们所采取的措施对植物耐盐胁迫能力的调节效果[22-24]。
1。3蛋白组学基本研究方法[25]
蛋白组学分析常用的技术手段包括双向电泳、液相色谱-质谱联用技术、生物质谱技术、生物传感芯片质谱、CAT技术、蛋白质芯片等。
1。3。1 双向凝胶电泳
双向电泳(Two dimensional electrophoresis, 2 -DE)技术展示了蛋白质的高分辨率, 是蛋白质组学研究中最常用也最有价值的核心技术之一。双向凝胶电泳的原理是:第一向根据蛋白质有不同等电点的性质用等电聚焦的方法分离蛋白,第二向就是根据蛋白质有不同分子量的性质用SDS-PAGE的方法分离,把复杂的蛋白质混合物中的蛋白质在二维平面上分开。 通过各种分析软件对结果图像进行分析。现在多数蛋白质的鉴定都是用质谱分析的方法。文献综述
差异凝胶电泳(Differential in-gel electrophoresis, DIGE)是为了改进双向电泳的重复性和灵敏度,而发展出来的一种荧光染料标记的双向电泳技术。该研究是对样品蛋白质表达差异进行分析,样品来自正常组织和癌变组织,所以在医学上也是一种很大的突破。跟常规的双向电泳技术比较,它的优点是DIGE更加简单,劳动强度降低,效率更高。
1。3。2 液相色谱-质谱联用技术
液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)是液相色谱和质谱联用的仪器。它结合了属于液相色谱仪器有效分离热不稳定性以及高沸点化合物的分离能力与质谱仪很强的组分鉴定能力。液质联用的技术是科学研究和检测上数一数二的分析技术,它凝集了液相色谱仪的高分离效能和质谱仪的高灵敏度、高选择性能。液相色谱—质谱联用仪广泛的应用于食品安全、药品检测和开发,农药残留、水质分析和蛋白质生物标志物的发现和验证等工作。为科学研究和检测做出了很大的贡献。
1。3。3 生物质谱技术
质谱技术的基本原理是在样品经过离子化后, 根据离子质荷比(m/z)的不同进行分离并确定相对分子量。生物质谱技术的优点是结果准确度高、灵敏度高而且容易实现自动化。该技术在生命科学研究中得到很大程度的认同,被广泛的应用到诸多领域特别是在蛋白质、核酸、医学检验等领域。使生物质谱技术成为蛋白质鉴定分析的主要技术的同时也在不断的改善中发展了该技术。生物质谱研究:蛋白质相互作用、定量蛋白质组分析和蛋白质翻译后修饰(如糖基化、磷酰化)等。该质谱法的缺点是:存在局限性,比如Leu和Ile、Lys和Gln不能被区别出来;有些多肽的固有序列不能用质谱法测定;不能区分分子量和带电电荷相同的同分异构体。