鱼类性腺的发育与分化易受外界环境条件影响而改变其遗传性别,一般认为在发育早期存在一个敏感期,此期用性激素处理可以实现性反转,从而获得单性育种需要的性反转鱼。成熟的人工诱导鱼类性反转技术,已被广泛用于鱼类养殖和遗传育种。根据生产的需要控制途径主要有性激素处理或种间杂交等,从而达到单性鱼养殖提高产量的目的。乌苏里拟鲿的雌雄鱼生长差异十分明显,性成熟后的雄性个体大约是雌性个体体重的3倍左右。为了提高乌苏里拟鲿的产量,需要获得大量雄鱼。将在雌激素诱导作用下性反转成功的乌苏里拟鲿与正常的雄鱼(XY)交配,若得到的雄鱼与雌鱼的比例为3:1,则可判定性反转后的乌苏里拟鲿(XY)在生理上为雌鱼,但在遗传上仍为雄鱼。再用得到的雄鱼与正常雌鱼(XX)交配,若得到的全部为雄鱼,则可知这条雄亲鱼的性染色体为YY。这么一来,我们就可以得到大量雄鱼,这样其产量则大大提高,养殖乌苏里拟鲿的经济效益也随之大大提高。目前,有关乌苏里拟鲿的研究仅见于生殖生物学领域[4-5]和生化遗传学领域[6] 。本文使用石蜡切片法以及苏木精,曙红染色法对性反转后的乌苏里拟鲿的性腺结构进行观察分析以及讨论,文章为研究结果的初步报道。文献综述
2 材料与方法
2。1 实验材料
研究所用的乌苏里拟鲿是经过一学期的雌性激素的喂养,喂养过程中,一日三次喂食由雌性激素泡制的丰年虫,每三天换一次水。实验结束后,从中随机取体型差不多大的,健康未受伤害的乌苏里拟鲿作为实验材料。全体用4%多聚甲醛固定48小时,30%、50%、70%梯度酒精脱水,样品置于70%酒精-20℃保存备用。
2。2 方法
2。2。1 取材
为了保证组织内细胞原有的结构和形态,使其与生活时相似,因此要求所取材料越新鲜越好。在显微镜下,用解剖刀将刚取来的10条乌苏里拟鲿的头、尾切下来,躯干分别放入10个标有序号的网格里。
2。2。2 脱水
柔软并含有多量水分的组织是不易切成薄片的,故必须增加组织的硬度。石蜡切片法就是使石蜡渗入组织,以达到支持增硬的作用。但水与石蜡是不相混合的,因此,在浸蜡、包埋前须将组织中的水分完全除去,这一步骤即为脱水。常用的脱水剂是酒精。脱水时,将放有10条躯干的网格篮先从放入低浓度的酒精开始,然后,递增浓度,直至无水酒精。具体方法是,将材料经80%酒精→85%酒精→90%酒精→95%酒精(I)→95%酒精(II)→无水酒精(I)→无水酒精(II),各级酒精40-45min。脱水应彻底,否则材料不能透明,影响石蜡的浸入,致使难以切片。注意在每阶段脱水后,把酒精淋干再放入另一阶段。来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com
2。2。3 透明
酒精与石蜡互不相溶[7],因此,脱水后的材料在浸蜡前,还必须经过透明。透明剂既可替代组织中的酒精,又能溶解石蜡,以利石蜡的渗入。二甲苯是常用的一种透明剂。将脱水后的材料经1:1无水酒精与二甲苯→1:2无水酒精与二甲苯→二甲苯(I)→二甲苯(II),各级时间为25min,20min,10min,10min,务使组织达到透明为止。
2。2。4 浸蜡
将已透明的材料移入熔化的石蜡内浸渍即为浸蜡。其目的是去除组织中的透明剂,而使石蜡渗入整个组织,获得一定的硬度和韧度,以便切成薄的切片。先将装有56-58℃石蜡的三个蜡杯放在熔蜡箱内熔化,并使熔蜡箱的温度保持恒定(约58℃),切勿太高或太低。然后将透明了的材料放入二甲苯:石蜡1:1→二甲苯:石蜡1:2→石蜡(I)→石蜡(II)。浸蜡时间视材料大小而定,各杯时间分别为20min,20min,1h,1h。