2。3。2拟南芥的种植（无菌）

（1） 超净台紫外灭菌：于超净台中放入烧杯，灭菌水（之前灭菌的双蒸馏水），一次性枪头（已灭菌），医用胶带等进行紫外灭菌30min

（2）消毒：选择饱满的5种拟南芥种子，分别放入1。5ml离心管中，用记号笔做好标记种子类型。用无菌水浸泡20分钟，用75%酒精溶液消毒离心管外表面后，入超净工作台用50% bleach消毒液 (商业用立白漂白水与无菌水1:1混合) 浸泡且摇动3-5 min，使拟南芥种子表面充分消毒； 时间不可超过10min，不然种子会被杀死。

（3）清洗：5min后，倒出消毒液，用无菌水漂洗4—5次，每次2-3分钟；

（4）播种：将消毒完的种子用枪头吸取，然后点播种于MS固体培养基上，注意不要戳破培养基。播种结束后利用医用胶带封口培养皿，并将封口处靠近酒精灯火焰旋转一圈，达到进一步灭菌和加强医用胶带的封口效果。用记号笔在培养皿上标记所播种子类型。

（5）春化：将播种后的培养皿置于4℃冰箱中春化48h；

（6）培养：将春化后的种子放入培养室，培养室温度22-25℃，16 h光照8 h黑暗，光照强度为100-150umol/m2s；

2。3。3高温处理

（1）按如上播种方法进行拟南芥播种，在播种环节用记号笔把每个培养皿分成三部分（图1），标记A类培养皿9个，B类培养皿9个，共18个。在一个培养皿播种120粒种子。

3种类型的种子各播种40粒，播完用医用胶带封口后放入培养室中培养。当幼苗长出4片嫩叶（成长时间大约是7天）后，开始进行实验处理。

拟南芥播种分布图

（2）调节烘箱温度为43℃，将A类培养皿分成3组，记为A1,A2,A3，每组3个。B类培养皿也分成3组，记为B1,B2,B3，每组3个。将A1,B1组的培养皿放入烘箱中处理2小时，A2,B2组的培养皿放入烘箱中处理1小时，A3,B3组的培养皿于培养室中继续培养（对照）。文献综述

处理结束后，将培养皿放回培养室培养6天，观察小苗的生长情况。以拟南芥幼苗子叶颜色为绿色作为拟南芥的存活标准，记录拟南芥的存活个数，并计算其存活率。

2。3。4激素处理

2。3。4。1含IAA，NAA培养基配置

（1）配置IAA,NAA母液，0。5mg/ml（即0。5g/l）

（2）本实验培养基数量较为庞大，故将实验培养基分两次处理，具体浓度配方表如表2，表3。

表2：IAA，NAA培养基配置配方1

类型 浓度（mg/l） MS（ml） 所需母液（ul）

IAA 0 120 0

0。02 120 4。8

0。05 120 12

0。1 120 24

NAA 0。1 120 24

0。15 120 36

0。2 120 48

表3：IAA，NAA培养基配置配方2

类型 浓度（mg/l） MS（ml） 所需母液（ul）

IAA 0 120 0

0。125