本研究针对上述科学问题，以浙江台州多氯联苯污染区分离所得的固氮蓝藻Nostoc PD-2为材料，对其进行了藻种鉴定和功能基因分析，测定了该藻种在无氯BG11培养基和不同浓度DTT条件下对PCB28的生物降解特性进行研究，旨在为PCB28污染的生物修复提供科学依据。 

1 材料与方法

1。1 实验藻种的分离和培养

本研究中的蓝藻分离筛选根据Carmichael[15]的方法进行。将采回的蓝藻混合物置于显微镜下，用灭菌处理的玻璃毛细管(孔径0。3mm)挑选丝状藻体，至无菌水中洗涤，重复洗涤蓝藻3~4次，将得到的藻种培养于BG11液体培养基。蓝藻繁殖一定数量后，进行镜检，确定其为单一藻种后，采用无氯的BG11液体培养基，其成分如下：硝酸钠1。5g/L，七水硫酸镁0。075g/L，乙二胺四乙酸二钠0。001g/L，三水磷酸氢二钾0。04g/L，碳酸钠0。02g/L，柠檬酸0。006g/L，柠檬酸铁铵0。006g/L。 筛选得到藻种后静置培养箱培养，条件为温度25±2℃，光照强度998lux，光暗比12h: 12h。

1。2 主要化学试剂及仪器文献综述

试剂：PCB28购自百灵威公司，为色谱纯。 二硫苏糖醇购自Sigma公司，为分析纯。 TRIzol Reagent和cDNA合成试剂盒采购于杭州浩基生物有限公司，RNase-Free DNase I和RNase-Free Water购自Qiagen公司，Power SYBR® Master Mix购自Invitrogen公司，其他常规试剂均购于国药集团化学试剂有限公司，都属于分析纯。 

仪器：紫外可见光分光光度计(UV-1100型，上海美谱达仪器有限公司)，iQTM5多重实时荧光定量PCR仪(美国Bio-Rad公司)，高压蒸汽灭菌锅(上海博迅 YXQ-LS-30S11)，超净工作台(苏净安泰 SW-OJ-2FD)，恒温金属浴，电子天平(METTLER TOLEDO AL204)，移液器(Eppendorf & Gilson)。

1。3 实验方法

1。3。1 功能藻种细胞中叶绿素a的分析方法

配置PCB28-甲醇工作液，浓度为100mg/L，备用。取对数生长期（OD680=0。38）的无氯培养藻种20mL置于50mL的锥形瓶中，向其中加入400μL PCB28工作液，调整体系中工作液终浓度至2mg/L。 设置不添加PCB28的空白对照组，静置于25℃，998lux，光暗比12h: 12h的光照培养箱中培养，分别于1、3、5、7d进行取样测定。

取PCB28暴露后的蓝藻培养物的暴露产物，4000rpm，离心10min，将藻种和上清液分离，采用热乙醇法检测藻种中叶绿素a的含量。

1。3。2 不同浓度DTT对PCB28降解影响的暴露实验

取20mL指数增长期藻种（OD680=0。38），置于50mL洁净锥形瓶中，每个锥形瓶中加入溶解于甲醇的PCB28工作液至初始浓度为2mg/L，向培养体系中加入DTT分别调节体系中DTT的终浓度至10μg/L，100μg/L和1000μg/L ，同时设置不添加PCB28的空白对照组，静置于25℃，998lux，光暗比12h: 12h的光照培养箱中培养，7d后取样测定。

1。3。3 DTT对降解促进的动力学暴露方法来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*

取20mL指数增长期藻种（OD680=0。38），置于50mL锥形瓶中，每个锥形瓶中加入溶解于甲醇的PCB28工作液至初始浓度为2mg/L，向培养体系中加入DTT，调节体系中DTT的终浓度至10μg/L和100μg/L ，同时设置不添加PCB28的空白对照组，静置于25℃，998lux，光暗比12h: 12h的光照培养箱中进行培养，分别于0。5、1、1。5、3、4。5、6d取样测定。

1。3。4 功能藻种脱氯效果的测定方法

本实验PCB28暴露无氯培养基上清液中的氯离子含量，采用硫氰酸汞高铁分光光度法测定。具体方法如下：将蓝藻培养物转移至50mL离心管中，4000rpm离心10min，吸取5mL上清液至25mL比色管中，向比色管中加入5mL去离子水，再加入2mL的硫酸铁铵溶液（60g/L）、1mL的硫氰酸汞-乙醇溶液（4。0g/L），混匀，室温下显色20min后于波长460nm处测量吸光度。