1。3研究目的、思路及拟解决的问题

本文以外来入侵种互花米草和自由生活线虫为研究对象，在我国沿海5个海岸带湿地生态系统中，分别采集互花米草群落和典型土著植物群落中的土壤线虫，分析土壤线虫群落的物种组成和群落结构，并基于线虫摄食习性和生活史特征划分营养功能群和生活史对策功能群；比较分析我国海岸带湿地土壤线虫物种多样性和功能多样性在入侵植物和土著植物群落间的差异，阐明互花米草入侵对我国海岸带盐沼湿地土壤生物群落及其相关生态功能的影响，为滨海湿地的环境监测、保护、生态修复和持续利用提供科学依据，为进一步完善全球生物多样性分布格局的理论体系提供重要的基础资料。

本研究主要拟解决的关键科学问题大致如下：1、互花米草的入侵对我国海岸带湿地自由生活线虫群落产生什么影响？2、互花米草入侵不同的滨海湿地类型对底栖线虫的影响是否存在差异？3、互花米草入侵对底栖线虫的影响是否存在纬度变异？研究思路主要如图1所示：

2材料与方法

2。1采样点布设

在我国沿海海岸带分别选取5个海岸带湿地：A福建漳州竹塔红树林保护区、B浙江温州乐清市西门岛、C上海崇明岛、D江苏盐城大丰港、E天津滨海新区天津港，如下图2所示。

2。2采样方案

在五个采样地分别选取面积大于200×100m的典型的互花米草群落样方和相邻的土著植物群落（芦苇或红树林）作为采样地点。其中福建、浙江两地采集土著植物红树林，上海、江苏、天津三地采集土著植物芦苇。在每个样方中，设置3条长为8m的样线，样线间间隔50m以上，在每条样线上每隔2m取一个底面积为5×5cm²，高为10cm的土柱，一条样线共采集5个土柱。将5个土柱的样品混合，制成混合土样，以降低土壤空间异质性对土壤线虫群落的影响。由此，每个植物群落中可得到3个土样，即3个重复，五个样地共30个样品。土样保存于4%的福尔马林中。

2。3线虫的分离与计数

将150g用福尔马林保存的土样，倒置45um的筛网上，用流动的清水缓慢冲洗，将福尔马林洗净。然后用Ludox悬浮液将筛网上的土样洗入500ml的量杯中（尽可能减少水分的转入），加入Ludox悬浮液至400ml处，用玻璃棒充分搅拌均匀使线虫悬浮在溶液当中，静置2个小时，使泥沙下沉。之后将静置后的Ludox悬浮液倒入套筛中，用清水缓慢冲洗，最后将筛网上的残渣用洗瓶冲洗到烧杯中，烧杯内即为收集好的线虫。将过滤的Ludox溶液重新倒入量杯中，按前面的步骤收集线虫，共重复3次。

将收集好的线虫用清水定容至200mL。用玻璃棒将其搅拌均匀，再用移液枪吸取10ml的悬浮液至计数板中。计数板加入适量的清水，将其置于解剖镜下观察，进行计数，计数重复3次，记录数值。最后将计数完毕的样品用洗瓶洗入筛网中，进行回收。文献综述

2。4线虫形态学鉴定

将线虫用挑针勾取线虫，将其转移至装有1。5ml水的小培养皿中，线虫挑选完毕后，加入等量的甘油酒精混合溶液（1：3：15）。将培养皿转移至干燥器中脱水，脱水时间约为两周，至酒精和水分蒸发完全。将载片恒温烘干器加热至80℃，将石蜡融化，用印章蘸取石蜡，在载玻片左侧制一腊圈，冷却凝固。用滴管滴一滴纯甘油至于腊圈中央，用钩针挑取线虫移至甘油中，等挑取完毕后（每滴甘油中线虫数量约为50条）用镊子轻放盖玻片。将装片置于载片恒温烘干器（80℃），等到石蜡完全融化，将装片置于实验桌上冷却凝固，即封片完成。将制成的线虫装片置于显微镜下进行形态学鉴定至属。