1。2方法

1。2。1菌种复苏

     将这7种猪链球菌划线接种到羊血琼脂培养基上，37℃培养过夜。观察到培养基上有菌落长成后，从中筛选具备典型特性的菌落接种于THB培养液中37℃振荡培养过夜，将液体培养物做gdh基因的PCR检测。PCR鉴定为阳性的即为猪链球菌。这一步骤为了确证冻存菌株没有因反复冻融而死亡。来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*

1。2。2 PCR   体系：25  μL

①10×PCR缓冲液        2。5μL

②dNTP                 0。5μL

③gdh上下游引物        各1μL

④TaqDNA聚合酶       0。5μL

⑤模板                 1μL

⑥ddH2O               18。5μL

  反应条件为：94℃预变性10min；94℃1min；56℃30s；72℃1min；30个循环。延伸温度为72℃,10min左右，设HA9801为阴性对照。

1。2。3药敏试验

   吸取200μL分离菌株菌液均匀涂布在M-H培养基上，用无菌镊子取上述这20种药敏纸片均匀放置在培养基表面并轻轻按压，使其紧贴。置培养皿于37℃恒温培养箱中培养24h。之后测定各药物的抑菌环直径。猪链球菌对各种药物敏感程度的判断标准[3