白芨有效成分的提取及功效评价(6)
（2）醇沉体积
在醇沉条件为70%乙醇，醇沉5h，加入不同体积的乙醇，探索乙醇的加入量对醇沉效果的影响。
（3）醇沉时间
在醇沉条件为乙醇浓度70%，4倍于提取液体积的乙醇，选择不同的醇沉时间探索其对醇沉效果的影响
2.4.4 响应面优化
（1）水提工艺优化
根据Box-Benhnken的中心组合实验设计原理单因素影响实验结果，选取浸提取时间、水料比、提取温度对白芨多糖浸提影响显著的三个因素，在单因素试验的基础上采用三因素三水平的响应面分析方法，以优化水提工艺。【12】
（2）醇沉条件优化
根据Box-Benhnken的中心组合实验设计原理单因素影响实验结果，选取乙醇浓度、醇沉体积、醇沉时间对多糖沉淀影响显著的三个因素，在单因素实验的基础上采取三因素三水平的响应面优化方法，得到最佳醇沉条件。
2.4.5 提取液多糖含量的测定
（1）总糖的测定【13】
1）40ug/mL葡萄糖标液的配置
精密称取干燥至恒重的葡萄糖0.040g，置于50mL烧杯。加入20mL蒸馏水溶解，溶解移入100mL容量瓶。用蒸馏水50mL分三次洗涤烧杯，洗涤液移入容量瓶。最后蒸馏水定容，摇匀备用。是为标准溶液。
2）6%苯酚试剂的配置
苯酚常温下为固态，用之前放入水浴中加热融化，用50mL小烧杯称取6g苯酚，加水转移到100mL容量瓶中，定容至100mL。4℃冰箱中保存备用。
3）标准曲线的制作
表2.1 苯酚硫酸法测定白芨提取液总糖
试管编号 0 1 2 3 4 5 6 7 8
标准溶液(mL) 0 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8
蒸馏水(mL) 2 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2
6%苯酚(mL) 1 1 1 1 1 1 1 1 1
浓硫酸(mL) 5 5 5 5 5 5 5 5 5
静置10min后，振荡器摇匀
室温静置20min
按表2.1将个试管编号后加入溶液。
以0号管为空白校正，于波长490nm处检测其他各管吸光度。
4) 样品测定
按下表加入提取液测其吸光度值。
表2.2 样品总糖检测
试管编号 S1 S2 S3
提取液(mL) 1 1 1
蒸馏水(mL) 1 1 1
6%苯酚(mL) 1 1 1
浓硫酸(mL) 5 5 5
5）计算方法
以0~9号管的吸光度作为横坐标(X)，对应浓度为纵坐标值(Y),用Oringin作图，显示公式和R平方值，得到浓度和吸光度之间的线性关系，把S1，S2，S3吸光度取平均值后带入线性方程中，得出样品溶液总糖含量C0。