结  论 14

致  谢 15

参 考 文 献 16

1  绪论

1。1  ALP的概念、性质及生理功能

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, EC 3。1。3。1, ALP)是由phoA基因编码的一种非特异性磷酸单酯酶，能使得磷酸单酯的水解反应速度加快。ALP广泛存在于动物体内，具体来说，其中ALP在小肠粘膜上的存在与其对于某些物质的吸收有关；在肾脏中所起到的作用主要与其重吸收的功能有关；在肝脏中主要是参与干细胞的排泄过程；ALP可直接参与磷代谢，在钙、磷的消化、吸收、分泌中也起到了相关作用。在骨骼的软骨和成骨细胞中，ALP在骨矿化过程中发挥了非常重要的作用，与成骨作用有关[1-4]。目前，由于ALP能够有效的加快水解磷酸单酯的过程，以及其同工酶在哺乳动物体内的分布特性和独特的生理功能，它在许多科学领域均已有了广泛的应用，并且具有相当重要的研究价值和应用前景。因此，如何简单、有效、快速地测定ALP的活性，尤其是成分复杂的临床组织和血清样品中ALP的活性及相关ALP抑制剂的筛选方面，在临床医学、免疫学研究、生物化学及分子生物学和分析化学等领域的研究与进一步应用均有着相当重大的意义。

1。2  ALP同工酶的分类

碱性磷酸酶是一组同工酶，而并非我们之前所认识的单一的酶。目前已知的人类ALP同工酶包括：①组织非特异性ALP，它来源于肝脏、肾脏、骨及其它脏器和组织，包括肝型ALP、肾型ALP和骨型ALP，其中骨型ALP在成骨过程中能够水解磷酸酯，在成骨过程减弱骨盐的形成[5]；②肠型ALP(IALP)，由子宫、肾近曲小管远侧端和肠黏膜上皮微绒毛分泌，包括胎儿IALP和成人IALP。其中，胎儿IALP会在患了各种癌症的病人的血清中，因此，它可以作为一种肿瘤标志物[6]；③胎盘型ALP(PLALP)，分早期PLALP和末期PLALP两种形式，，在女性的卵巢内能够分泌少量的PLALP，另外，在人们的一些其他器官内也能够分泌PLALP。其在人体的生理功能很多，它在细胞膜的主动运输过程中起到了作用，另外它能够在母体内给胎儿提供一些营养物质，促进胎儿正常生长。因此，动态观察PLALP活性可用于女性的妊娠检查[7]；④类PLALP，其本质是精原细胞ALP，它会出现在女性的卵巢癌中，还有男性的精原细胞瘤中，另外在其他的一些癌症中也会出现这种酶。因此，它也能够作为肿瘤标记物[8]。由此我们可以了解到，不同类型的同工酶具有不同的作用。

1。3  ALP在临床医学上的作用

在临床医学上，为诊断和监测多种疾病，测定血清中ALP的活性已经作为非常重要的手段[2,9,10]。人们在患一些疾病时比如说原发性肝癌等，肝细胞会制造出更多的ALP，并且通过一些人体内渠道后进入到血液中，另外肝内一些其他的功能也会受损并且同时发生障碍，同样会使得大量的一些胆汁等进入到血液中，从而引起血清中的ALP浓度升高[11,12]。而在其他各种肠道疾病中，血中IALP明显升高也非常常见，有时候在患肿瘤的病人血清中还会出现免疫球蛋白复合物型ALP。此外，人们也渐渐认识到，ALP同工酶能够作为识别肿瘤的一种特异性标志，如胰腺、肺脏、卵巢、睾丸、结肠和淋巴组织等恶性肿瘤病人血清中含有PLALP[13,14]。其中骨型ALP已经越来越受到人们的重视，因为它在骨代谢异常的过程中能起到作为标志的作用；由于在其他的骨代谢异常疾病中，首先病人血清中的骨型ALP与正常人血清中的骨型ALP含量不同，其次，因疾病的不同，其所含有的骨型ALP的量和活性也各有差异，所以我们可以通过检测血清骨型ALP的活性来检测人骨形成的变化过程[15-17]。ALP活性的检测在兽医临床上所具有的意义更大，已广泛将ALP标记抗体进行酶联免疫吸附分析(ELISA)和Western印迹分析等应用在免疫学研究方面[18-20]，即将ALP与显色剂或去磷酸化后能发光的底物相互作用，用来揭示靶与检测酶复合物的存在；与辣根过氧化物酶相比，将ALP用作标记酶，具有稳定性好、灵敏度高等优良特性，但也具有一定的缺点，比如成本高、标记困难等。在分子生物学和生物化学方面，用ALP催化除去DNA分子的5’末端磷酸基团以防止载体自连是基因克隆中的常规手段之一[21]。先用ALP水解脱去5’末端磷酸基团，再用(γ-32P)ATP标记5’末端，可用于化学测序，RNA测序和特异性DNA或RNA片段的图谱构建。应用ALP代替同位素标记核苷酸探针可用于分子杂交。同时，将phoA基因与其它基因融合表达杂合蛋白可用于基因表达的研究。此外，由于生乳中的ALP对温度的稳定性很高，在进行巴氏杀菌后，再将ALP的灭活，可以保证已将所有的致病菌都被杀死，因此可将ALP作为检验牛奶的巴氏灭菌的标志。在分析化学领域，ALP已广泛应用于生物分子、有机小分子及无机离子的高灵敏检测[22-25]。例如，在生物分子(如核酸、蛋白质、维生素、糖类和辅酶等)的电化学检测过程中，它可作为信号放大媒介体来实现对痕量待测生物分子的电化学高灵敏度检测。由此可见，如何简单、有效、快速地测定ALP的活性，尤其是成分复杂的临床组织和血清样品中ALP的活性，对其在临床医学、免疫学研究、生物化学及分子生物学和分析化学等领域的研究与进一步应用均有着相当重大的意义。认网