2。2。3 低渗处理
将肾细胞悬液放入台式离心机中,按照1000r/min的转速离心8 分钟,倒出上清液,收集细胞,留下底部少量液体,用吸管轻轻吹打成悬液,加入0。075 mol/l KCl溶液,将离心管放在试管架上,放入提前加热至37℃水浴锅中低渗处理60分钟,期间每隔10分钟取出离心管上下轻摇使肾细胞充分低渗。
2。2。4 固定
将低渗过的细胞按照1000 r/min的转速离心8分钟,倒出上清液,收集细胞,加入新配制的卡诺氏固定液(V(甲醇):V(冰醋酸)=3:1)固定30分钟,固定结束后按照1000r/min的转速离心8 分钟。按照相同方法再固定2次,倒出上清液,收集细胞,加入少量卡诺氏固定液,轻轻拍打均匀,制成肾细胞悬液。