基于末端转移酶延伸放大的电化学DNA传感器设计(6)
二、拉曼光谱表征【26】
将SH-ssDNA探针用5×PBS和TCEP以9:1的比例稀释1µM。在30℃下 取该溶液 3µL滴加在清洗干净的金电极表面 1 h 后用大量超纯水冲洗，除去未组装上的残留ssDNA 。将此电极做拉曼光谱分析。结果如图5。由图可知，电极A未组装上ssDNA，同其组装节点Au颗粒少且呈散在分布有关；电极B表面Au 颗粒大小均匀，排列致密平整，检测到拉曼光谱信号，表明电极表面组装上了ssDNA。
图5 自组装拉曼光谱图
1.3.2 DNA分子杂交的检测
一、 使用杂交指示剂进行电化学检测
在DNA电化学传感器中必须引入电活性识别物,即杂交指示剂或复合指示体系。杂交指示剂是一类具有电活性的物质，起着DNA电化学传感器的信号传递作用，将DNA分子杂交之间的生物信号转化为易于检测的电化学信号。根据杂交指示剂与ssDNA和dsDNA结合方式和结合能力的差异，通过循环伏安法和时间电流法测定其氧化还原电流和峰电位可以识别和测定DNA分子。作为杂交指示剂，必须能够选择性的识别ssDNA和dsDNA而又不与DNA链发生不可逆的共价结合，同时又能给出电流或电势识别的信号。通常来说，DNA电化学生物传感器的杂交指示剂应该对dsDNA比对ssDNA具有更高的选择结合能力。