羰基还原酶来源广泛，是一种具有高度的化学、区域和立体选择性的生物催化剂，常用于生物还原前手性酮制备手性醇[9]。近几年来，用羰基还原酶作为生物催化剂参与生物合成研究，且在工业上的应用日益增多，也越来越实用，适合于实验的发展。本实验旨在筛选一株具有转化[(3R，5R)-CDHHB]能力的菌株，并研究其羰基还原酶的酶学性质。

此次实验成功筛选得到具有转化6-氰基-(3R，5R)-二羟基己酸叔丁酯活性的菌株5-1-k4a，对其进行菌种鉴定，经Biolog法鉴定，结果表明 5-1-k4a菌株为季也蒙毕赤酵母细胞（P．guilliermondii ）。再进行酶活性质的测定并研究其催化性能，以建立6-氰基-(3R，5R)-二羟基己酸叔丁酯的生物催化合成工艺。6-氰基-(3R，5R)-二羟基己酸叔丁酯是合成他汀药物的重要手性中间体， 一些学者报道了化学催化还原方法：Wess 等[12]在低温条件下利用三乙基硼/硼氢化钠催化还原合成二羟基酯；Everaere 等[13]使用氯化钌/β-氨基醇还原5-羟基-3-羰基酯， 但是de值只有80%左右。化学催化剂法需要在苛刻条件下进行，并且选择性差。相对而言，生物酶法具有条件温和、选择性高等优势[14]。

所以，在为了节省材料，以及方便实验的情况下，我们优先选择运用生物法来进行实验。论文网

2 材料与方法

2。1 菌株 

实验菌种来自江苏淮安的土壤样品，通过使用富集培养基和筛选平板培养基分离得到若干对底物具有一定耐受性的微生物，将这些微生物进行发酵培养并收集菌体以进行生物转化反应，从而进行菌种的筛选。

2。2 试剂

底物6-氰基-（3R,5R）-二羟基己酸叔丁酯（[(3R，5R)-CDHHB]），葡萄糖，酵母粉，磷酸二氢钾，七水合硫酸镁，乙醇，磷酸钾，乙酸乙酯，正己烷，异丙酮，硫酸铵，氯化钠，琼脂粉，硼氢化钠，

2。3 主要仪器设备

电子分析天平                                赛多利斯科学仪器（北京）有限公司

超净工作台                                  苏州净化设备有限公司

高压灭菌锅                                  太仓市实验设备厂

电热鼓风干燥箱                              上海博讯实业有限公司医疗设备厂

全温立式摇瓶柜                              河南兄弟仪器设备有限公司                                                 

恒温振荡器                                  常州金坛荣华仪器厂

高速冷冻离心机                              湖南赫西仪器装备有限公司

全温立式生化培养箱                          上海新苗医疗器械制造有限公司

高效液相色谱仪                              济南上地电子科技有限公司

2。4 主要培养基

富集培养基（I）：

分别称取葡萄糖30 g，酵母粉12 g，磷酸二氢钾2。4 g，七水合硫酸镁0。9 g于烧杯中，加入400 mL的纯净水溶解，再经过量筒定容至600 mL，电磁炉加热，并玻璃棒充分搅拌至完全溶解沸腾，接着称取0。125 g底物溶于乙醇，配成浓度为500 g/L的溶液，最后将0。5 mL底物溶液加入到500 mL的培养基中。