2。1 FitD基因缺失突变体的构建 4

2。1。1引物的设计与合成 4

2。1。2pf-5菌株基因组的提取 4

2。1。3PCR扩增FitD上、下游片段 4

2。1。4DNA片段的纯化回收 5

2。1。5连接和转化 5

2。2获取缺失突变体菌株 7

2。2。1Pf-5的转化 7

2。2。3菌落PCR验证 7

2。3野生型和突变体标记GFP 7

2。4利用野生型和突变体处理秀丽小杆线虫 7

3结果与分析 8

3。1 FitD突变载体的构建 8

3。2 Pf-5的FitD 缺失突变体的构建 8

3。3 GFP标记野生型pf-5和pf-5ΔFitD突变体 9

3。4 Pf-5处理根结线虫 9

3。5 Pf-5突变体在秀丽小杆线虫体内的定殖情况 9

3。6 Pf-5突变型与野生型的杀线虫效果对比 10

4讨论 10

致谢 11

参考文献 11

生防假单胞菌杀线虫活性物质的鉴定

引言

植物寄生线虫是一类两侧对称原体腔无脊椎动物，它能寄生在植物体内，危害寄主植物，引起植物病害，造成作物产量和质量上的损失，以及巨大的经济损失。全世界主要农作物每年因植物寄生线虫危害造成的损失高达1250亿美元，其危害超过细菌病害和病毒病害，仅次于真菌病害，同时植物寄生线虫加剧真菌和细菌侵染，是诱发植物病害的重要原因之一[1,2]。其中，植物根结线虫和孢囊线虫分布范围最广，对农作物生产造成的危害尤为严重[3-5]。化学药剂由于具有防效好，见效快的特点，一直是防治植物寄生线虫的主要方法，但同时也带来了一系列的副作用，如产生抗药性、破坏生态平衡以及造成环境污染等。因此，采用生物防治方法来治理线虫病害，符合现代可持续农业的发展要求[6]。常用于防治线虫的生物资源主要包括细菌、真菌、放线菌和原生动物等[7,8]。其中，生防细菌对植物寄生线虫的作用方式包括：直接寄生、影响线虫的生活行为、干扰线虫与寄主植物之间的识别、改变根系分泌物与线虫作用方式、产生拮抗物质抑制线虫卵的孵化、阻止幼虫的生长和直接杀死线虫等[9-11]。论文网

生防假单胞菌(Pseudomonas spp。)作为植物根围促生细菌(plant growth promoting rhizobacteria, PGPR)研究领域的典型代表，具有高效利用种子和根系渗出物，快速生长繁殖，有效定殖在植物根际，产生多类活性代谢物质等优点，可有效防治由植物病原真菌、细菌和线虫等引起的土传病害，被作为植物病害生防菌得到广泛研究。部分菌株已经商业化应用于植物病害生物防治，如假单胞菌ESC-10和A506等[12]。国内的铜绿假单胞菌M18和荧光假单胞菌2P24等也具有很好的生防效果[13,14]。此外，部分假单胞菌抗菌物质已在农药杀菌剂领域得到商业化的应用，如硝吡咯菌素（pyrrolnitrin，Prn）衍生出的拌种咯和咯菌腈[15]；我国自主研发的申嗪霉素，其主要成份吩嗪-1-羧酸（phenazine-1-carboxylic acid，PCA）产自M18菌株[13]。