假单胞菌(P。 protegens) Pf-5菌株，先前命名为荧光假单胞菌（P。 fluorescens ）Pf-5。该菌株分离自棉花根际土壤，对卵菌、真菌和细菌等引起的植物病害具有较好的防治效果。Pf-5菌株全基因组已知，能遗传操作，是研究生防假单胞菌的模式菌株[16]。Pf-5菌株能通过非核糖体途径合成多种活性物质，这些物质在其防治植物病害中起着重要作用。如2,4-二乙酰基间苯三酚（2,4-diacetylphloroglucinol, DAPG）具有抑制细菌、真菌和卵菌活性[16]，还能作为激发子诱导植物产生系统抗性（Induced systemic resistance，ISR)[17]；硝吡咯菌素对菌核病菌和丝核病菌具有较强的抑制活性[18]；藤黄绿脓菌素（Pyoluteorin, Plt）具有抑制卵菌和细菌的活性[19]；新鉴定的根菌素（Rhizoxin）和脂肽类物质（orfamideA）也具有抑制真菌的活性[20-21]；挥发性抑菌物质氢氰酸（Hydrogen cyanide, HCN），有助于防治土传病害[16]。另外，Pf-5菌株能产生两种嗜铁素Pyochelin和pyoverdine，这类物质能帮助其竞争铁元素抑制病原物生长[16]。

近期的研究结果表明，pf-5菌株含有杀螟虫幼虫活性相关基因簇Fit。该菌株对苗圃的棉蚜（Aphis gossypii Glover）、烟芽夜蛾（Heliothis virescens）和小麦茅虫（Sitodiplosis mosellana）表现出有效口服致死活性。用每毫升仅含1000个假单胞菌细胞的悬浮液喷洒植物叶表面，足以杀死70-80％的草地夜蛾（Spodoptera frugiperda (J。E。Smmith)）和棉铃虫（Helicoverpa armigera Hubner）幼虫[22]。本课题组前期研究结果也表明，Pf-5菌株对根结线虫（Meloidogyne incongnita）和秀丽小杆线虫(C。elegans)都具有很强的致死活性。但该菌株以及其Fit基因簇产物对昆虫以及线虫的作用机理还未知。本研究以生防菌Pf-5以及其Fit基因簇为研究对象，以模式生物秀丽小杆线虫为作用对象。鉴定该菌株的杀线虫物质以及作用机理。研究为开发新型环保线虫生防药剂奠定理论和实践基础。

1材料与方法 

1。1 供试菌株与质粒

1。1。1 供试菌株与质粒

本研究所涉及的菌株、质粒见表1

表1研究所用菌株与质粒

Table 1 The bacteria and plasmid used in this study

菌株/质粒

Strains/Plasmids 相关特性

Characteristics 来源

Source

Pseudomonas protegens

Pf-5 Wild type this lab

Pf-5ΔFitD

Pf-5(gfp)

Pf-5ΔFitD(gfp) ΔFit D mutant of Pf-5 this study

Escherichia coli

Top10 strains for gene cloing Laboratory stock

Plasmids 文献综述

pK18mobsacB

pRK-2013

Vector,Ampr

Vector,Kn

this study

this study

1。1。2 菌株的培养与保存

培养：液体培养一般在37℃摇床进行，过夜培养。

短期保存：划线或涂布于含相应抗生素的LB平板上，贮存于4 ℃冰箱，每3-4周重新划线保存。

长期保存：若为菌苔，则取与30%灭菌甘油充分混合后，贮存于﹣80℃冰箱；若为菌液，则与50%灭菌甘油充分混合后，贮存于﹣80℃冰箱。

1。2 培养基与抗生素

1。2。1 培养基

（1）LB培养基(1000 ml) 的配置见表2

表2  LB培养基配方

Table 2 LB medium formulation

试剂名称 m(g)

蛋白胨