1。6。1 Spizizen转化法

取出冻存的菌株，待部分融化后，挑取少许涂布至LB培养基上，37 ℃培养12 h。

用灭过菌的接种环挑取部分新鲜菌落与用50 mL锥形瓶装的5 mL GMI液体培养基中，用透气膜封口。30 ℃，100 rpm培养过夜。

次日取2 mL转接于50 mL锥形瓶装的18 mL的GMI液体培养基，透气膜封口。37 ℃，200 rpm，培养3。5 h。

然后再取以上10 mL菌液转接与250 mL锥形瓶装的90 mL GMII中，透气膜封口。37 ℃慢摇培养90 min。培养完后，用大离心管分装菌液并配平，离心收集菌体，4 ℃下3000 rpm，5 min。

用2。5 mL上清液重悬菌体。吸取0。5 mL加入至1。5 mL离心管中，并加入1 μg质粒DNA。37℃缓慢振荡（100 rpm）45 min。

吸取200 μL的加入质粒的菌液以及不加质粒（作为对照）的菌液，涂布抗性平板，37 ℃培养过夜。来;自]优Y尔E论L文W网www.youerw.com +QQ752018766-

能生长枯草芽孢杆菌的即为阳性转化子，计算平均转化率（CFU/μg DNA）。

1。6。2  转化子验证

每个实验组都设有一个对照组，对照组中在抗性培养基上涂布未转入质粒的菌液。设立空白对照组目的是排除感受态制备过程中菌株突变的情况。本实验的空白对照组都未生长出菌落。除此之外，空白对照组也不能作为唯一验证依据，需要将转化子进行质粒抽提（质粒抽提的方法仍采用试剂盒法），并进行琼脂糖凝胶电泳[10]，如果成果显示质粒条带，则说明成功。

2 结果与分析

2。1  菌落生长情况分析

牛奶与酸奶本身作为食品，都进行过灭菌处理，所以每个涂布的平板上大多都没有分离出细菌，浓度梯度高的平板上也只生长了1~3个菌落。以下是牛奶酸奶样品的所有菌落特征。